[发明专利]一株分泌戊菌唑单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用

说明书

一株分泌戊菌唑单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，属于免疫化学技术领域，所述杂交瘤细胞株的保藏编号为：CGMCC No.22333。本发明将戊菌唑的完全抗原与等量弗氏佐剂混合乳化，通过颈背部皮下多点注射免疫BALB/c小鼠。首次免疫用完全弗氏佐剂进行乳化，多次加强免疫用不完全弗氏佐剂，最后一次用戊菌唑完全抗原冲刺免疫。将高效价和高灵敏度小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行融合，采用选择培养基，筛选出两种细胞融合后的杂交细胞；再经过间接竞争酶联免疫法筛选细胞，并进行多次亚克隆，得到一株单克隆抗体杂交瘤细胞株。此细胞株分泌的单克隆抗体，对戊菌唑具有较好的检测灵敏度，ICsubgt;50/subgt;值为0.426ng/mL。

技术领域

本发明属于食品安全免疫检测领域，具体涉及一种分泌戊菌唑单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。

背景技术

戊菌唑的英文通用名为：Penconazole，化学名称：1-[2-(2，4-二氯苯基)戊基]-1H-1，2，4-三唑。作用机理：戊菌唑是目前活性最高的三氮杂环类杀菌剂，是甾醇脱甲基化抑制剂，可由作物根、茎、叶等组织吸收，并向上传导抑制甾醇脱甲基化，在真菌孢子萌发和侵入期间起作用。主要用途：用于防治白粉菌科，黑星菌属及其他疾病的孢菌纲、担子菌纲和半知菌类的致病菌，对叶斑病、黑星病、炭疽病、白粉病有很好的防治效果，尤其是对南瓜、葡萄、仁果、观赏植物和蔬菜的上述病原菌效果显著，对葡萄白腐病特效。

目前，戊菌唑检测方法主要为仪器检测，常用的有气相色谱法、液相色谱法和气相色谱-质谱法。尽管这些基于色谱的方法具有很高的灵敏度和特异性，存在一些缺点，例如需要彻底的样品净化，高溶剂消耗，昂贵的设备以及熟练的技术人员。因此，需要一种快速，简便的检测戊菌唑残留物的方法。

酶联免疫吸附试验(ELISA)是一种极为高效、灵敏、快速的检测方法，检测时对样本的前处理简单、纯化步骤少、分析容量大、检测成本低而且操作简便，适用于大量样本的现场快速检测，因此在药物残留分析中得到了广泛应用。而使用酶联免疫法检测戊菌唑的前提是得到对戊菌唑具有高特异性和高灵敏度的单克隆抗体，因此，找到一种制备对戊菌唑具有高特异性和高灵敏度的单克隆抗体的方法十分关键。

发明内容

本发明的一个目的是提供一株能分泌戊菌唑单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，此杂交瘤细胞株可用于分泌戊菌唑单克隆抗体，戊菌唑单克隆抗体对戊菌唑具有较好的检测灵敏度(IC₅₀值为0.426ng/mL)，可以用于建立戊菌唑的免疫学检测方法，检测食品中戊菌唑的残留。

本发明的另一目的是提供一种用于制备杂交瘤细胞株的戊菌唑半抗原及其制备方法，用于制备完全抗原，进而应用在制备分泌戊菌唑单克隆抗体的杂交瘤细胞株、戊菌唑单克隆抗体方面。

本发明的又一目的是提供一种试剂盒，包含本发明提供的保藏编号为CGMCCNo.22333的杂交瘤细胞株，或者通过本发明提供的戊菌唑半抗原获得的单克隆细胞株，或本发明提供的戊菌唑单克隆抗体，用于检测戊菌唑。

具体技术方案：

本发明提供了一种分泌戊菌唑单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.22333，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

本发明还提供一种戊菌唑半抗原，其分子式如下：

在本发明的实施案例中，所述戊菌唑半抗原的制备方法，具体步骤为：

将1-(2，4-二氯苯基)-2-(1，2，4-三唑-1-基)乙醇，用吡啶溶解，再加入丁二酸酐，搅拌溶解后，再加入4-二甲氨基吡啶，密封后，放入水浴锅中，搅拌至反应完全，反应物氮气吹干；加入水，以盐酸调节pH值为3～4，再加入二氯甲烷萃取，收集有机相，提取液经无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，得少量白色粘稠液体，吹干后即得到戊菌唑半抗原。