[发明专利]嵌合抗原受体免疫细胞及其制法和应用

权利要求书

1.一种工程化免疫细胞，其特征在于，所述工程化免疫细胞为T细胞或NK细胞，并且所述的免疫细胞具有以下特征：

(a)所述免疫细胞表达嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor，CAR)，其中所述CAR靶向肿瘤细胞的表面标志物；和

(b)所述的免疫细胞表达外源的信号转换蛋白，并且所述信号转换蛋白位于所述免疫细胞的细胞膜上，并且具有免疫抑制性受体的胞外结构域、跨膜区(或跨膜结构域)和免疫激动性受体的胞内结构域。

在另一优选例中，所述的免疫抑制性受体为TGF-β受体。

在另一优选例中，所述的免疫激动性受体选自下组：IL-7受体、IL-15受体、IL-12受体、IL-2受体、IL-18受体、IL-21受体，或其组合。

在另一优选例中，所述的免疫激动性受体为IL-7受体。

2.如权利要求1所述的工程化免疫细胞，其特征在于，所述的CAR具有式Ia或Ib所示结构：

L1-scFv-H-TM1-C-CD3ζ (Ia)

L1-scFv-H-TM1-C-CD3ζ-(A-S)n1-A-E-(A-S)n2 (Ib)

式中，

L1为无或信号肽序列；

scFv为靶向抗体的单链可变结构域；

H为无或铰链区；

TM1为跨膜结构域；

C为共刺激信号结构域；

CD3ζ为源于CD3ζ的胞浆信号传导序列(包括野生型、或其突变体/修饰体)；

A为自剪切2A肽；

S为其他的外源重组蛋白；

n1或n2各自独立地为0或1；

E为信号转换蛋白；

所述“-”连接肽或肽键。

3.如权利要求1所述的工程化免疫细胞，其特征在于，所述的信号转换蛋白具有式V所示结构：

L2-Z1-TM2-Z2 (V)

式中，

L2为无或信号肽序列；

Z1为免疫抑制性受体的胞外结构域；

TM2为跨膜区；

Z2为免疫激动性受体的胞内结构域；

所述“-”连接肽或肽键。

4.如权利要求1所述的工程化免疫细胞，其特征在于，所述编码信号转换蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.:8中第523-933位、SEQ ID NO.:9中第523-908位、SEQ ID NO.:10中第523-936位、SEQ ID NO.:11中第523-911位、SEQ ID NO.:16中第937-1347位、SEQ ID NO.:17中第937-1350位所示。

5.一种制备权利要求1所述的工程化免疫细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(a)提供一待改造的免疫细胞；和

(b)对所述的免疫细胞进行改造，从而使得所述的免疫细胞表达所述的CAR分子和外源的信号转换蛋白，从而获得权利要求1所述的工程化免疫细胞。

6.一种制剂，其特征在于，所述制剂含有权利要求1所述的工程化免疫细胞，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

7.一种如权利要求1所述的工程化免疫细胞的用途，其特征在于，用于制备可预防和/或治疗癌症或肿瘤的药物或制剂。

8.如权利要求7所述的用途，其特征在于，所述肿瘤选自下组：实体瘤、血液瘤、淋巴瘤，或其组合。

9.如权利要求7所述的用途，其特征在于，所述肿瘤表达选自下组的标志物：间皮素、Claudin18.2、MUC1、GPC3、PSCA、Her2，或其组合。

10.一种用于制备权利要求1所述的工程化免疫细胞的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有容器，以及位于容器内的：

(1)第一核酸序列，所述第一核酸序列含有用于表达所述CAR的第一表达盒；和

(2)第二核酸序列，所述第二核酸序列含有用于联合表达信号转换蛋白的第二表达盒。