[发明专利]一种基于mSNP技术检测大白菜种子纯度的混样检测方法

说明书

本发明涉及一种基于mSNP技术检测大白菜种子纯度的混样检测方法，其利用引物对1F/R～22F/R进行，所述引物对1F/R～22F/R的基因序列见SEQ IDNo.1～44；本发明采用mSNP技术，在扩增子不变的情况下，可以检测到更多的SNP变异；采用混样的方法进行检测，在减少扩增工作量的同时降低了测序成本，也加快了检测速度，可在一天时间内最多完成1440粒种子的检测。本方法是利用测序技术直接读取单核苷酸多态，通过程序直接进行纯度结果的判读，结果直观，可靠，避免受种子发育期、及结果判读时主观因素的影响。

技术领域

本发明属于种子纯度检测领域，具体涉及一种基于mSNP技术检测大白菜种子纯度的混样检测方法。

背景技术

大白菜(Brissica campestris L.ssp.pekinesis)又名结球白菜、黄芽菜、白菜，属于十字花科芸苔属。大白菜起源于我国，已有五千多年的栽培历史，种质资源丰富，生态类型多样，是我国主要的传统蔬菜之一。20世纪70年代，杂种优势的利用在大白菜新品种选育中占主导地位，取得了丰硕成果。为了在短时间内培育出优良的新品种，育种家会选择少数优质的骨干亲本，使品种的遗传基础不断趋于狭窄。品种的差异直接影响生产，大白菜杂交种中常有亲本自交系种子或其他品种种子造成的生物学混杂。种子纯度是种子质量的主要指标，定义为本品种的种子数占供检本作物样品种子数的百分率，必需对杂交种的纯度进行鉴定后才能包装出售。

种子纯度鉴定从80年代以来，从常规的形态特征鉴定到物理化学鉴定，发展到生化鉴定，再进一步发展应用到分子标记鉴定，实现了由表观水平、蛋白质水平到核酸水平的发展。形态鉴定是应用最早的方法，根据种子形态、幼苗形态和植株的形态进行鉴定。传统的田间形态鉴定是种子纯度鉴定的仲裁方法，此方法可以参考的形态多、结果较为可靠，但是所需周期长，花费大且易受季节、环境和人为因素等限制。物理化学鉴定主要用于区分燕麦品种，在大白菜鉴定中罕见报道。生化鉴定包括同工酶和蛋白质电泳技术。生化标记具有组织特异性、可用的谱带较少、谱带的差异有限且在不同器官、不同生长时期带型差异不稳定，导致结果的稳定性和准确性降低，不能满足越来越多品种检测的要求。分子标记是继形态、生化标记之后发展迅速的标记技术，具有不易受时期环境影响、多态性好、结果准确等优点。分子标记可分为三大类：一是以酶切为基础的标记技术，如RFLP，多态性稳定但操作复杂、成本好、多态性较少；二是以PCR反应为基础的标记技术，如RAPD、SSR、SCAR等，此类标记成本低、操作简便但稳定性较差；三是酶切和PCR相结合的技术，如AFLP，该标记兼具RFLP和RAPD的优点，有较高的可靠性和高效性、DNA用量少，但是操作步骤繁琐，成本费用较高。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种基于mSNP技术检测大白菜种子纯度的混样检测方法，其高效、准确、成本低。

为了实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：

技术方案一：

一种于mSNP技术的大白菜种子纯度检测的引物组，其特征在于，其包括引物对1F/R、引物对2F/R、引物对3F/R、引物对4F/R、引物对5F/R、引物对6F/R、引物对7F/R、引物对8F/R、引物对9F/R、引物对10F/R、引物对11F/R、引物对12F/R、引物对13F/R、引物对14F/R、引物对15F/R、引物对16F/R、引物对17F/R、引物对18F/R、引物对19F/R、引物对20F/R、引物对21F/R、引物对22F/R；其中每条引物对均由正向引物和反应引物组成；

所述引物对1F/R中，F引物的序列SEQIDNo.1所示，R引物的序列如SEQIDNo.2所示；

所述引物对2F/R中，F引物的序列SEQIDNo.3所示，R引物的序列如SEQIDNo.4所示；

所述引物对3F/R中，F引物的序列SEQIDNo.5所示，R引物的序列如SEQIDNo.6所示；