[发明专利]一种丝状真菌裂褶菌生物矿化的检测方法

权利要求书

1.一种丝状真菌裂褶菌生物矿化的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

A) 挑取裂褶菌子实体组织，制得裂褶菌子实体样品，同时对裂褶菌子实体进行组织分离，获得裂褶菌菌丝；

B) 利用光学显微镜观察所获得的裂褶菌菌丝，确认是否有晶体物质存在；

C) 对裂褶菌菌丝和子实体样品进行处理；

D) 在光学显微镜观察结果基础上，进一步在扫描电子显微镜下分别观察步骤C)处理后的裂褶菌菌丝样品和实体样品，确定生物矿化发生部位；

E) 对步骤C)处理后的裂褶菌菌丝样品和子实体样品的晶体区域和非晶体区域进行能谱分析，分别测得其所具有的元素成分；

F) 在能谱分析发现晶体区某离子含量显著高于非晶体区后，再进一步通过质谱法测定晶体区中该元素含量，将所得数据与其它种类食用菌数据进行比对分析，确定裂褶菌是否发生生物矿化以及矿化产物。

2.根据权利要求1所述的一种丝状真菌裂褶菌生物矿化的检测方法，其特征在于，步骤A)中所述的裂褶菌菌丝是采用有助于观察不同生长期形态的插片培养法培养。

3.根据权利要求2所述的一种丝状真菌裂褶菌生物矿化的检测方法，其特征在于，所述的插片培养法包括：组织分离获得实验菌株，将其在无菌条件下接种于PDA培养皿，置于25℃生化培养箱中培养2d，在培养皿中倾斜插入无菌盖玻片，继续培养，以获得菌丝体。

4.根据权利要求1所述的一种丝状真菌裂褶菌生物矿化的检测方法，其特征在于，步骤C)中的处理方法为：先将由步骤A)培养而得到的裂褶菌菌丝以及步骤A)所述裂褶菌子实体采用PBS缓冲液洗脱，洗脱后采用固定液进行固定，然后脱水，再进行真空冷冻干燥，最后继续烘干。

5.根据权利要求4所述的一种丝状真菌裂褶菌生物矿化的检测方法，其特征在于，所述真空冷冻干燥的真空度为55～65Pa，冷冻干燥温度为-55～-65℃，冷冻干燥时间为23～25h；所述烘干是采用烘箱在烘箱温度为50～55℃下烘干23～25h。

6.根据权利要求1所述的一种丝状真菌裂褶菌生物矿化的检测方法，其特征在于，步骤E)所述的能谱分析是指分别对各样品的晶体及非晶体不同区域进行多点及表面扫描，每个特定区域重复扫描三次。

7.根据权利要求1所述的一种丝状真菌裂褶菌生物矿化的检测方法，其特征在于，步骤E）中所述能谱分析为利用能谱机器自带的能谱分析软件进行全自动数据采集和归一化处理，并根据数据库中的标准数据进行元素定量分析。

8.根据权利要求1所述的一种丝状真菌裂褶菌生物矿化的检测方法，其特征在于，步骤F）中所述质谱法测定是利用高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱仪对各子实体进行测试。