[发明专利]一种检测羟苯磺酸钙胶囊中硫酸二乙酯和硫酸二异丙酯基因毒性杂质的方法

说明书

本发明公开了一种GC‑MS法检测羟苯磺酸钙胶囊中硫酸二乙酯和硫酸二异丙酯基因毒性杂质的方法。本发明通过将沸点较高的硫酸二乙酯和硫酸二异丙酯与衍生化试剂生成低沸点易气化的碘乙烷、碘代异丙烷，该方法的衍生化处理操作简单；通过GC‑MS法间接测定羟苯磺酸钙胶囊中硫酸二乙酯和硫酸二异丙酯基因毒性杂质含量，对比HPLC方法，该方法在灵敏度上具有明显优势。该方法的分析方法学验证结果表明，该方法专属性，灵敏度，精密度，准确度，线性符合相关分析方法验证指导原则，各评价指标优异。

技术领域

本发明涉及药物分析技术领域，特别是涉及一种检测羟苯磺酸钙胶囊中硫酸二乙酯和硫酸二异丙酯基因毒性杂质的方法。

背景技术

跟据ICH M7《为限制潜在致癌风险而对药物中引起DNA诱变的杂质进行评估和控制的指导原则》的定义，基因毒性杂质为具有DNA反应活性的物质，这些物质在低含量水平下，也有引起DNA损伤，导致DNA诱变，从而引发癌症的风险。根据Derek/Sarah预测结果(ICHM7)，硫酸二乙酯和硫酸二异丙酯显示基因毒性，其中硫酸二乙酯为ICH M7 2类基因毒性杂质，硫酸二异丙酯为ICH M7 3类基因毒性杂质。

羟苯磺酸钙胶囊主要用于微血管病的治疗；慢性静脉功能不全(静脉曲张综合征)及其后遗症(栓塞后综合征，腿部溃疡，紫痫性皮炎皮炎等郁积性皮肤病，周围血管郁积性皮肤病等)。羟苯磺酸钙的合成工艺中包括了磺化反应，在精制步骤使用了乙醇和异丙醇溶剂，可能生成硫酸二乙酯和硫酸二异丙酯，在羟苯磺酸钙原料药中引入基因毒性杂质，继而将基因毒性杂质引入羟苯磺酸钙胶囊中。提升羟苯磺酸钙胶囊的质量控制水平，对于该药品的用药安全具有重要意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供了一种检测羟苯磺酸钙胶囊中硫酸二乙酯和硫酸二异丙酯基因毒性杂质的方法，它专属性强、灵敏度高和精密度好。

为了解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案：

GC-MS法检测羟苯磺酸钙胶囊中硫酸二乙酯和硫酸二异丙酯基因毒性杂质的方法，包括以下步骤：

1)将待检测羟苯磺酸钙胶囊的内容物样品溶解于衍生试剂中，摇匀、密封，得供试品溶液；

2)取硫酸二乙酯和硫酸二异丙酯，用稀释液溶解并稀释、摇匀，作为对照品贮备液1；移取部分对照品储备液用稀释液稀释、摇匀，作为对照品贮备液2；移取部分对照品储备液2用稀释液稀释、摇匀，作为对照品贮备液3，取衍生试剂与对照品储备液3混合、摇匀，压盖密封即得对照品溶液；

3)按照气相色谱和质谱条件，取空白溶液、对照品溶液、供试品溶液注入气相色谱质谱联用仪进行试验，记录色谱图，通过色谱图结果得知检测样品是否含有上述的基因毒性杂质。

计算：通过外标法计算衍生化产物碘乙烷、碘代异丙烷的量，根据衍生化反应式计算出供试品溶液中硫酸二乙酯和硫酸二异丙酯的量，从而间接检测出供试品中硫酸二乙酯和硫酸二异丙酯的量。

所述步骤1)中的羟苯磺酸钙胶囊的内容物中的羟苯磺酸钙每20mg用1.0mL衍生试剂溶解，再加入1.0mL稀释液。

步骤2)中，每100mL对照品贮备液1中，含有硫酸二乙酯和硫酸二异丙酯各31.5mg；将0.5mL对照品贮备液1用稀释液稀释至50ml，摇匀，作为对照品贮备液2；将1mL对照品贮备液2用稀释液稀释至25ml，摇匀，作为对照品贮备液3；将1mL衍生试剂与1mL对照品贮备液3混合，摇匀，压盖密封即得对照品溶液。

所述的衍生化试剂的配置是：取60g碘化钠和50mg五水硫代硫酸钠，并溶解于40mL超纯水中，获得衍生化试剂。

步骤3所述的色谱柱为DB-624UI，固定相为6％氰丙基苯基-94％二甲基聚硅氧烷；载气为氦气；进样口温度为150℃；MS检测器；流速为1.5mL/min；分流比为5:1；进样量为1.0mL。