[发明专利]一种杜仲酸性多糖、提取方法及其在制备抗结肠癌药物中的应用

说明书

本申请公开了中药材的分离提取制备领域中的一种杜仲酸性多糖，其主要由甘露糖、葡萄糖醛酸、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖组成，其摩尔比为13.45：1.05：4.21：67.4：9.72：4.17；还公开了杜仲酸性糖EUP‑A2‑3的提取方法，主要通过DEAE‑cellulose和SepharoseCL‑6B层析制备得到。研究发现，杜仲酸性多糖EUP‑A2‑3通过调控细胞周期阻滞起到抑制结肠癌细胞细胞活力的功效。

技术领域

本发明涉及中药材的分离提取制备领域，具体涉及一种杜仲酸性多糖、提取方法及其在制备抗结肠癌药物中的应用。

背景技术

在现代快速的生产生活方式中，人们的不良生活习惯、日益严峻的环境污染、慢性刺激与创伤和免疫、遗传、内分泌等内、外源性因素是肿瘤的主要诱因。全球常见的恶性肿瘤有肝癌、胃癌等，其危害大、死亡率高。

目前，综合化学疗法、放射线治疗、手术治疗以及一些其他方法是恶性肿瘤的主要治疗手段，但这些传统的治疗方法因其特异性较低、易致机体产生耐药性，对机体会造成较大的不良反应。因此安全、高效且毒副作用小的抗肿瘤药物的需求仍很迫切，植物多糖因具有较强的抗肿瘤生物活性，对多种肿瘤细胞均有较好的抑制作用，且对正常细胞几乎没有毒副作用，因此成为了一种潜在的新型抗肿瘤药物资源。

杜仲科植物杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)的干燥树皮即为杜仲(Eucommiaecortex)。杜仲的主要功效为强筋骨、补肝肾、安胎等，可用于筋骨无力、腰痛肾虚、妊娠漏血、胎动不安、高血压等疾病的治疗。

文献记载，辛晓明等人以环磷酰胺为阳性对照药，发现对于S-180肉瘤的生长，杜仲总多糖可对其产生抑制作用，证实了杜仲总多糖具有一定的抗肿瘤活性(辛晓明,王大伟,赵娟,王浩,费洪荣,董峰.杜仲总多糖抗肿瘤作用的实验研究[J].医药导报.2009；28(06):719-21.)，但杜仲树皮总多糖由多种多糖级分组成，各多糖级分活性也不尽相同，因此如何找到针对特定肿瘤活性较好的多糖的精细化级分是目前的研究重点。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种对抗结肠癌具有较好活性的杜仲酸性多糖EUP-A2-3。

本发明的目的之一提供一种杜仲酸性多糖EUP-A2-3，所述杜仲酸性多糖EUP-A2-3主要由甘露糖、葡萄糖醛酸、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖组成，其摩尔比为13.45：1.05：4.21：67.4：9.72：4.17。

本发明的目的之二是提供一种杜仲酸性多糖EUP-A2-3的提取方法，包括以下步骤：

S1、取杜仲树皮，加入5～15倍重量的水浸泡过夜；

S2、取浸泡后的杜仲树皮水煮提取2～5次，每次2～5h；

S3、合并多次水煮液后浓缩，用乙醇醇沉，冻干得到杜仲总多糖；

S4、杜仲总多糖经过DEAE-Cellulose层析，依次经过水、0.1mol/L的NaCl、0.3mol/L的NaCl洗脱；

S5、取S4步骤0.3mol/LNaCl的洗脱液，浓缩透析后，冻干得到EUP-A2；

S6、取EUP-A2，经Sepharose CL-6B分子筛凝胶层析，用0.9％的NaCl洗脱，测定信号峰，收集第三个信号峰样品，浓缩透析冻干得到杜仲酸性多糖EUP-A2-3。

其中第三个信号峰样品如图1所示。

进一步，步骤S2杜仲树皮加水煮沸后过滤得水煮液，滤渣加水继续煮沸，煮沸3次，每次3小时。

进一步，步骤S3采用终浓度为80％的乙醇。

进一步，步骤S4依次洗脱3倍柱体积。