[发明专利]一种小麦单株穗数主效QTL-qSnpp-5D连锁的分子标记方法和应用

权利要求书

1.一种用于鉴定或辅助鉴定小麦单株穗数性状的引物对，其特征在于：所述主效QTL-qSnnp-5D位点位于小麦5D染色体上，并且与所述主效QTL-qSnnp-5D位点连锁的分子标记为5D-1498421，本发明是以小麦基因组DNA为模板，采用5D-1498421如SEQ ID NO:1和SEQ IDNO:2所示引物对进行PCR扩增，对PCR产物进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，所得大小为332bp的DNA片段。

2.根据权利要求1所述的引物对，其特征在于，所述引物对5D-1498421由SEQ ID NO:1所示的上游引物和SEQ ID NO:2所示的下游引物组成，所示分子标记引物序列SEQ ID NO:1-2均为单链DNA分子，核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示：

SEQ ID NO.1：GACCAATTCACTTTCCGACG；

SEQ ID NO.2：CTCCGACTTTCATGGACAGT。

3.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述PCR产物大小为332bp,小麦以小麦科农9204为亲本，通过采用常规杂交并繁衍选育至F2代以上的科农9204小麦衍生品种或品系。

4.根据权利要求1所述的分子标记获取方法，主要包括以下步骤：

Z1、以待测小麦的基因组DNA为模板，采用权利要求1或2所述的5D-1498421引物对进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；

Z2、将PCR扩增产物在6.0％的非变性聚丙烯酰胺凝胶上稳压150V电泳分，根据电泳分离的结果判断是否存在使小麦单株穗数数量增加的QTL位点：

(1)如能够获得分子量为332bp的扩增片段，则表明存在权利要求1所述的使小麦单株穗数数量增加的QTL位点，预测该小麦品种或品系具有增加小麦单株穗数的基因；

(2)如未获得分子量为332bp的扩展片段，则该小麦品种或品系属于在该位点为不具有增加小麦单株穗数基因。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤Z1中的PCR扩增反应体系为10μl，包括：0.5μl如SEQ ID NO:1所示的上游引物，0.5μl如SEQ ID NO:2所示的下游引物，1μl的DNA模板，5μl的2×Taq PCR StarMix，反应体系用ddH₂O补至总量为10μl；

PCR扩增程序如下：DNA 95℃预变性5min后，[(95℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸展40s)循环34次]，最后72℃延伸5min，结束扩增，12℃保存。

6.根据权利要求4所述的方法,所使用的小麦品种或品系的DNA是指将小麦植株叶片分离提取后获得的DNA。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述6.0％的非变性聚丙烯酰胺凝胶是指100ml聚丙烯酰胺凝胶溶液中含有5.85g丙烯酰胺和0.15g甲叉丙烯酰胺。

8.与小麦单株穗数性状相关的分子标记，其特征在于，为以小麦基因组DNA为模板，采用权利要求1所述引物组进行PCR扩增所得的DNA片段即5D-1498421。

9.权利要求1或2所述的引物组或权利要求8所述的分子标记在如下任一中的应用：

(1)检测小麦品种或品系中是否含有增加小麦单株穗数的QTL；

(2)小麦分子育种。