[发明专利]孔蛋白单体的突变体、蛋白孔及其应用

权利要求书

1.一种孔蛋白单体的突变体，其中所述孔蛋白单体的突变体的氨基酸包括SEQ ID NO:1所示的序列或与其具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、80％、70％、60％或50％同一性的序列，并且所述孔蛋白单体的突变体的氨基酸包括在对应SEQ ID NO:1的H74、E123、和D129的一个或多个位置处的突变。

2.根据权利要求1所述的孔蛋白单体的突变体，所述孔蛋白单体的突变体的氨基酸包括在对应SEQ ID NO:1的71-129、74-213、71-213、或74-129的一个或多个位置处的突变。

3.根据权利要求1或2所述的孔蛋白单体的突变体，所述孔蛋白单体的突变体的氨基酸包括：

(1)对应SEQ ID NO:1的Q71、H74、S77、D109、E123、和D129的一个或多个位置处具有氨基酸的插入、缺失和/或替换；或者(2)对应SEQ ID NO:1的H74、L75、E123、D129、和D213的一个或多个位置处具有氨基酸的插入、缺失和/或替换。

4.根据前述权利要求任一项所述的孔蛋白单体的突变体，其中所述SEQ ID NO:1所示的序列来源于广古菌。

5.根据前述权利要求任一项所述的孔蛋白单体的突变体，其中所述孔蛋白单体的突变体的氨基酸突变选自以下：

(a)对应SEQ ID NO:1的Q71突变为G、A、V、L、I中的0至5种；H74突变为T、S、C、U、M中的0至5种；S77突变为T、S、C、U、M中的0至5种；D109突变为N、D、E、Q中的0至4种；E123突变为N、D、E、Q中的0至4种；D129突变为N、D、E、Q中的0至4种；和

(b)对应SEQ ID NO:1的H74突变为G、A、V、L、I中的0至5种；L75突变为G、A、V、L、I中的0至5种；E123突变为N、D、E、Q中的0至4种；D129突变为N、D、E、Q中的0至4种；D213突变为G、A、V、L、I中的0至5种。

6.根据前述权利要求任一项所述的孔蛋白单体的突变体，其中所述孔蛋白单体的突变体的氨基酸突变选自以下：

(a)对应SEQ ID NO:1的Q71G、H74T、S77T、D109N、E123N、和D129N；和

(b)对应SEQ ID NO:1的H74G和缺失L75、或缺失H74和L75G、E123N、D129N、和D213G。

7.根据前述权利要求任一项所述的孔蛋白单体的突变体，其中所述孔蛋白单体的突变体的氨基酸序列包括SEQ ID NO:13、或SEQ ID NO:14，或由其组成。

8.一种孔蛋白单体的突变体，其中所述孔蛋白单体的突变体的氨基酸包括SEQ ID NO:1所示的序列或与其具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、80％、70％、60％或50％同一性的序列，并且所述孔蛋白单体的突变体包括：

(1)在对应SEQ ID NO:1的Q71、H74、L75、S77、D109、E123、D129、和D213的一个或多个位置处具有氨基酸的突变；

(2)在对应SEQ ID NO:1的Q71G、H74T/H74G、L75缺失、S77T、D109N、E123N、D129N和D213G的一个或多个位置处具有突变；

(3)在对应SEQ ID NO:1的H74、E123、和/或D129处具有突变，并额外在Q71、L75、S77、D109、和D213的至少一个位置处具有突变；

(4)在对应SEQ ID NO:1的H74T/H74G、E123N、和/或D129N处具有突变；或者

(5)在对应SEQ ID NO:1的H74T/H74G、E123N、和/或D129N处具有突变，并额外在Q71G、L75缺失、S77T、D109N、和D213G的至少一个位置处具有突变。

9.一种蛋白孔，包括至少一个前述权利要求任一项所述的孔蛋白单体的突变体。