[发明专利]一种新的糖苷酶及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种新的糖苷酶，其特征在于，所述糖苷酶SWMU-CK-1的DNA序列如SEQ ID NO.1所示，其来源于健康梅花鹿的粪便。

2.根据权利要求1所述的一种新的糖苷酶，其特征在于，所述糖苷酶SWMU-CK-1的蛋白质序列如SEQ ID NO.3所示。

3.根据权利要求2所述的一种新的糖苷酶的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：

1)基因发现：取健康梅花鹿的粪便，使用Qiagen粪便DNA基因组提取试剂盒提取梅花鹿粪便的总DNA，并对提取的总DNA进行基因测序，将测序的基因与现有的糖苷酶编码基因序列BbBgl(Genebank NO.CP006715.1,1366947to 1368227)进行对比，得到一种新的糖苷酶基因命名为SWMU-CK，其DNA序列如SEQ ID NO.2所示；

2)糖苷酶基因SWMU-CK-1的获得：根据步骤1)中得到的新的糖苷酶基因SWMU-CK，基于基因密码的简并性，使用GeneOptimizer算法，在单次运算中考虑到了DNA序列中特定功能Motif、重复序列、GC含量、mRNA二级结构、密码子偏好性等相关优化参数，在不改变其所编码的蛋白序列的前提下，对糖苷酶基因SWMU-CK序列进行优化，并对优化后的糖苷酶基因SWMU-CK进行全基因合成，得到新的糖苷酶基因命名为SWMU-CK-1，其DNA序列如SEQ IDNO.1所示；

3)糖苷酶SWMU-CK-1的制备：将步骤2)中得到的糖苷酶基因SWMU-CK-1与载体pET-28a(+)连接，得到重组质粒pET-28a(+)/SWMU-CK-1，用重组质粒pET-28a(+)/SWMU-CK-1将E.coliBL21感受态细胞转化为重组E.coli BL21细胞，用异丙基硫代半乳糖苷IPTG对重组E.coli BL21细胞进行诱导表达，得到菌液后，超声破碎菌体，离心，取上清进一步纯化，得到糖苷酶SWMU-CK-1的酶溶液。

4.根据权利要求1或2所述的一种新的糖苷酶SWMU-CK-1在水解人参皂苷Rd中的应用。