[发明专利]基于核酸适配体探针的PDGF-BB识别方法及检测PDGF-BB的试剂盒

说明书

本发明提供一种基于核酸适配体探针的PDGF‑BB识别方法：使样本中的PDGF‑BB与核酸适配体探针发生免疫反应，核酸适配体探针的核苷酸序列包括SEQ ID NO.1所示序列。核苷酸序列包括SEQ ID NO.1所示序列的核酸适配体对PDGF‑BB展现出突出的特异性和亲和力，以包括了SEQ ID NO.1所示序列的核酸适配体作为靶向PDGF‑BB的核酸适配体探针，能够灵敏、准确、快速地识别PDGF‑BB抗原蛋白并与其稳定地结合，能够避免假阳性的情况出现。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地，涉及一种基于核酸适配体探针的 PDGF-BB识别方法及检测PDGF-BB的试剂盒。

背景技术

血小板衍生生长因子(platelet-derived growth factor，PDGF)是一种强效的丝裂原和重要的促肿瘤血管生成生长因子，可由多种血细胞、组织细胞和一些肿瘤细胞产生。目前对肿瘤细胞中PDGF表达与检测的研究已成为生物医学研究领域的热点之一。

PDGF-BB为PDGF家族中活性最强的亚型血小板衍生生长因子。目前， PDGF-BB的常用识别方法为酶联免疫分析技术(ELISA)，这一方法的基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅有无定性或定量分析。

核酸适配体是能够和靶标分子特异性结合的人工合成的核酸，具有稳定的二级结构。核酸适配体识别分子的模式与抗体类似，但与蛋白质类抗体相比，核酸适配体具有更多的优越性，如不受免疫条件和免疫原性限制，可体外人工合成，制备简单快捷，变性与复性可逆，可修饰并易于长期保存和室温运输等。更重要的是，核酸适配体的靶分子更为广泛，可以是蛋白质、核酸、小肽、氨基酸、有机物甚至金属离子等。此外，核酸适配体还具有以下优势，如：化学性质稳定、至今未见报道存在免疫原性或毒性、亲和力高、特异性强、易于进行改造修饰。这些特性使得核酸适配体在生物医药研究领域得到广泛应用，成为不可缺少的有力工具。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于核酸适配体探针的PDGF-BB识别方法及检测PDGF-BB的试剂盒，以提高PDGF-BB检测的灵敏度和准确度。

根据本发明的一个方面，提供一种基于核酸适配体探针的PDGF-BB识别方法，：使样本中的PDGF-BB与核酸适配体探针发生免疫反应，核酸适配体探针的核苷酸序列包括SEQID NO.1所示序列。

优选地，使样本中的PDGF-BB分别依次与抗体、核酸适配体探针发生免疫反应，形成抗体-蛋白-核酸适配体的夹心结构。

优选地，在形成夹心结构后，洗去未与PDGF-BB结合的过量核酸适配体探针，对参与构建夹心结构的核酸适配体探针进行PCR扩增，利用PCR扩增结果表征样本中的PDGF-BB。

根据本发明的另一个方面，提供一种检测PDGF-BB的试剂盒，其配备的物料包括固相载体和核酸适配体探针，固相载体的表面包被了靶向PDGF-BB的捕获抗体，核酸适配体探针的核苷酸序列包括SEQ ID NO.1所示序列。

优选地，其配备的物料还包括洗涤液，洗涤液为含0.5％吐温20、0.1mol/L 的磷酸盐缓冲液。

优选地，洗涤液含有0.05％叠氮化钠。

优选地，洗涤液的pH＝7.2。

优选地，其配备的物料还包括Taq-DNA聚合酶、PCR反应缓冲液、dNTP 和引物，引物与核酸适配体的部分核苷酸序列互补。