[发明专利]青环海蛇毒素竞争法胶体金/纳米花免疫层析检测卡

说明书

本发明涉及抗体工程与免疫检测领域，提供了一种青环海蛇毒素SN311竞争法胶体金/纳米花免疫侧流层析检测卡。本发明提供的青环海蛇毒素SN311竞争法胶体金/纳米花免疫侧流层析检测卡，检测时间10 min，胶体金免疫侧流层析检测卡的检测阈值（消除T线）达到25μg/mL，检测限（vLOD）达到0.1 ng/mL；纳米花免疫侧流层析检测卡的检测阈值（消除T线）达到25μg/mL，检测限（vLOD）达到0.01 ng/mL。首次利用纳米花材料与抗青环海蛇毒素SN311单克隆抗体结合，制备胶体金/纳米花免疫侧流层析检测卡，可实现对青环海蛇毒素SN311的高灵敏快速检测。

技术领域

本发明属于抗体工程与免疫检测领域，具体涉及一种青环海蛇毒素SN311竞争法胶体金/纳米花免疫侧流层析检测卡。

背景技术

我国是海洋大国，在实现海洋资源可持续开发的过程中，沿海海域存在的有毒海洋生物势必对海洋作业人员的生命健康造成威胁，因此海洋生物伤的防治研究工作对生产、医疗工作、科学研究以及军队维护有重要的现实意义，所以必须尽快着手开展抗海洋生物伤的科学应用研究。

青环海蛇（Hydrophis cyanocinctus Daudin）广泛分布在我国山东以南的沿海区域，其蛇毒毒性强烈，主要的成分为α-神经毒素和一些其他蛋白，起主要作用的为α-神经毒素。α-神经毒素能够结合在骨骼肌运动终板部位的烟碱型乙酰胆碱受体，从而阻断骨骼肌的神经肌肉接头传递，因此青环海蛇咬伤会出现肌肉麻痹，从而导致呼吸肌麻痹进而机体窒息死亡。由于青环海蛇蛇毒难以采集，对于青环海蛇毒素的研究及检测也相对滞后，此开展关于青环海蛇蛇毒检测方法的研究具有重要意义。

免疫胶体金层析技术的实现还得益于其载体免疫胶体金层析试纸条（immunochromatograp hic test strips，ICTSs），一种通过硝酸纤维素膜将加入的待检测样品固定在能与样品发生特异性结合的受体处位置，随着复合物的随摸流的累积，胶体金在检测试纸条上显色，这个过程往往只需要几分钟时间，因此此技术大大降低了检测的时间成本，加之其操作简单，特异性强，灵敏度高，很快在科学研究中得到广泛应用。随着纳米材料技术的成熟，金属纳米粒子的使用也越来越广泛，金属纳米粒子具有有与纳米材料一样的光电性，以及其独特的生物相容性，自然而然受到免疫学的重视，在免疫学研究中的应用随着胶体金的广泛使用而更加深远。胶体金因为受离子层的静电作用在溶液中以胶体分散状态显现。胶体金纳米粒子作为标记材料，其制备工艺简单，稳定性强，粒子分散性好以及优质的光学特性，在免疫标记方法上具有独特的优势。金纳米花作为一种新型的高催化胶体金技术在近几年发展迅速，金纳米花是在胶体金基础上通过种子生长法放大胶体金粒子，行成的形似花状的纳米粒子，其具有更显著的光学消化系数和催化活性，一定程度上大大提高了标记检测的灵敏度。目前制备金纳米粒子的方法有物理合成法和化学合成法，但化学合成法中的液还原法也称为种子生长法因其操作简单而受到广大研究者的青睐。种子生长法是在胶体金颗粒的基础上利用还原氯金酸行成表面不规则的较大颗粒的金纳米花。实验中采用对苯二酚作还原剂，可以调控合成了不同粒径的纳米花。

发明内容

本发明的目的是提供一种快速和特异性较强的青环海蛇毒素SN311竞争法胶体金/纳米花免疫侧流层析检测卡，该检测卡能够实现对青环海蛇毒素SN311的快速灵敏检测。

为实现上述目的，本发明提供了一种青环海蛇毒素SN311竞争法胶体金/纳米花免疫侧流层析检测卡，检测卡包括样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和塑料卡壳；所述硝酸纤维素膜上设置有质控线（C线）和检测线（T线），所述质控线上喷有羊抗鼠的IgG抗体，所述检测线上包被有青环海蛇毒素SN311抗原；所述的金标垫上含有胶体金/纳米花标记的抗青环海蛇毒素SN311单克隆抗体。

所述金标垫中所含有胶体金/纳米花标记的抗青环海蛇毒素SN311单克隆抗体，是由胶体金/纳米花标记的抗青环海蛇毒素SN311单克隆IgG抗体溶液以每100 mm/s 和2 μL/cm的喷涂速度通过喷金点膜机喷涂在金标垫上干燥后得到的。