[发明专利]一种八色荧光光谱校准试剂及其制备方法

说明书

本发明公开了一种八色荧光光谱校准试剂及其制备方法，采用人工设计合成的8个模板DNA，每个模板DNA模板分别包含1对引物的结合位点，并根据每个片段的预设长度，可实现片段长度与荧光精确控制。每对引物中的上游引物的5’端分别采用8种不同荧光标记，在一个特定反应体系内进行复合扩增，可同时获得含有八种荧光产物的荧光光谱校准试剂，无需进行单色荧光片段的混合和调配即可直接应用于荧光光谱校准。该方法极大的简化了荧光标准物的制备工艺流程，避免了复杂繁琐的操作。本发明的制备方法可以稳定的获得该标准物质，具有效率高，操作简便的特点。

技术领域

本发明涉及DNA检测技术领域，具体涉及一种八色荧光光谱校准试剂及其制备方法。

背景技术

DNA检测技术已成为现代法庭科学领域最为重要的技术手段之一，是处置各类案件、重特大事故及自然灾害等重大事件中最有效的个体识别工具。DNA检验设备及DNA检测试剂是DNA检测工作得以开展的两个核心要素。

在国内DNA检测实验室最常见的检测设备主要是3130、3130xl、3500、3500xl型遗传分析仪。国际法庭科学DNA检测领域的仪器设备经历了四色、五色至六色的发展历程。

最早用于DNA检测的DNA试剂体系是英国法庭科学服务部(FSS)建立的TH01、FES\FPS、vWA和F13A1四位点复合扩增系统，被称为第一代复合扩增体系，匹配概率接近万分之一。1994年，FSS发展了第二代复合扩增系统(SGM)，包括六个多态性STR基因座和一个性别基因，分别是TH01、vWA、FGA、D8S1179、D18S51、D21S11和Amelogenin(牙釉质基因)，匹配概率接近五千万分之一。1998年，在此基础上又增加了四个新STR基因座：D19S433、D2S1338、D16S539和D3S1358，匹配概率可达到百亿分之一。美国FBI为了满足办案需要建立了联合DNA索引系统(Combined DNA Index System，CODIS)，该系统由13个STR基因座组成，分别为TPOX、D3S1358、TH01、vWA、FGA、D7S820、D21S11、D18S51、D5S818、D13S317、CSF1PO、D16S539和D8S1179，无关个体的平均随机匹配概率大于万亿分之一。2001年，美国ABI公司推出AmpFlSTR Identifiler试剂盒，首次使用五色荧光检测系统，其中四色标记PCR产物，剩余一种荧光颜色用于检测内标，以校正PCR产物片段的电泳迁移。2013年后，美国ABI公司陆续推出了24个位点的六色荧光DNA检验试剂盒Globalfiler，包含25个位点的试剂盒VeriFiler及VeriFiler Plus。同时，美国Promega公司也推出了包含24位点的六色荧光试剂盒PowerPlex Fusion，上述试剂盒均基于进口遗传分析仪。国内的一些相关单位和试剂公司，也推出了多种不同的五色、六色STR复合扩增检测试剂盒，如公安部物证鉴定中心的Typer21(21位点)、TyperY36(36位点)等试剂盒，中德美联的EX25(25位点)、Y37(37位点)试剂盒，海尔施的PanGlobal(27位点)、PathFinder Plus(37个Y位点)试剂盒等。由此可见，DNA检测技术的发展具有所检测荧光数逐渐增加的特点。

近年来，我国法庭科学DNA检验技术的发展迅速，在DNA检测关键仪器设备及试剂国产化方面取得了多项突破，近日，我所基于五色及六色荧光技术，创新性研制出国际上首个可实现八色荧光检测的遗传分析仪、复合扩增试剂及分析软件，实现了该领域的技术引领。八色荧光光谱校准试剂，是八色荧光STR复合扩增检验试剂盒应用于国产遗传分析仪的必备配套试剂，是国产八色荧光试剂能够与国产法医DNA专用检测平台紧密结合的重要纽带。国内外多家公司所推出的多种不同的DNA检验试剂盒，均配备了专用的荧光光谱校准物，其制备技术方法保密。因此，迫切要求开展自主八色荧光光谱校准试剂研发开发工作。