[发明专利]自诱导表达系统的筛选和构建方法及其应用

权利要求书

1.基于群感效应的自诱导系统，其特征在于，包括阻遏蛋白控制元件和阻遏蛋白对应的启动子；

所述阻遏蛋白控制元件包括阻遏蛋白编码基因、表达阻遏蛋白编码基因的组成型启动子、小分子诱导剂编码基因和控制小分子诱导剂编码基因表达强度的rbs序列。

2.如权利要求1所述的自诱导系统，其特征在于，所述的阻遏蛋白包括Tra、Ahy、Bra、Bja、Cin、Cer、Esa、Lux、Las、Rhl、Rpa、Sma、Aub、Aus、Afe中的一种或多种，所述的小分子诱导剂编码基因包括酰基高丝氨酸内酯表达的基因。

3.如权利要求1或2所述的自诱导系统，其特征在于，所述的小分子诱导剂编码基因包括C2 HSL、C4 HSL、C6 HSL、C8 HSL，、C10 HSL、C12 HSL、C14 HSL、3OC6 HSL、3OC8 HSL、3OC10 HSL、3OC12 HSL、3OC14 HSL、pC HSL。

4.如权利要求1至3任一项所述的自诱导系统，其特征在于，所述阻遏蛋白编码基因来源于细菌，所述细菌为革兰氏阴性菌；

优选地，为埃希菌属Escherichia、巴斯德菌属Pasteurella、假单胞菌属Pseudomonas、变形杆菌属Proteus、农杆菌属Agrobacterium或根瘤菌属Rhizobium中的一种细菌；

最优选地，为埃希菌属Escherichia或假单胞菌属Pseudomonas中的一种细菌；

所述埃希菌属的细菌为大肠埃希菌Escherichia coli、蟑螂埃希菌Escherichiablattae、弗格森埃希菌Escherichia fergusonii、赫尔曼埃希菌Escherichia hermannii或伤口埃希菌Escherichia vulneris中的一种细菌；

所述假单胞菌属的细菌为铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa、恶臭假单胞菌Pseudomonas putida、荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens、鼻疽假单胞菌Pseudomonas melioides或产碱假单胞菌Pseudomonas alkalogenes中的一种细菌。

5.如权利要求4所述的自诱导系统，其特征在于，所述阻遏蛋白编码基因来源于根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens、嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila、沼泽红假单胞菌Rhodopseudomonas palustris、慢生型大豆根瘤菌Bradyrhizobium japonicum、豆科根瘤菌Rhizobium leguminosarum、球形红杆菌Rhodobacter sphaeroides、玉米枯萎病菌Pantoea stewartii、费氏弧菌Vibrio fischeri、铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa、粘质沙雷氏菌Serratia marcescens或氧化亚铁硫杆菌Acidithiobacillus ferrooxidans中的一种细菌；

优选地，为慢生型大豆根瘤菌Bradyrhizobium japonicum或玉米枯萎病菌Pantoeastewarfii。

6.如权利要求1至5任一项所述自诱导系统的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)扩增阻遏蛋白编码基因、表达阻遏蛋白编码基因的组成型启动子、小分子诱导剂编码基因和阻遏蛋白对应的启动子，并设计控制小分子诱导剂编码基因表达强度的rbs序列。按照表达阻遏蛋白编码基因的组成型启动子-阻遏蛋白编码基因-控制小分子诱导剂编码基因表达强度的rbs序列-小分子诱导剂编码基因-阻遏蛋白对应的启动子-需要表达的目的基因的顺序融合形成重组基因；

2)将上述步骤1)中获得的重组基因片段与载体连接，获得群感效应自诱导系统的通用载体；所述载体带有阻遏蛋白编码基因、小分子诱导剂编码基因和阻遏蛋白对应的启动子。