[发明专利]大豆胞囊线虫新小种X12的提纯方法及应用

权利要求书

1.一种大豆胞囊线虫新小种X12的提纯方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)采集受大豆胞囊线虫X12感染的病土，将病土和无菌细沙以3：0.5～1.0的体积比均匀混合，制备成试验病土，分装在大豆胞囊线虫抗性鉴定用的实验杯中；

(2)将萌发3～5d，子叶出土期的大豆优异抗源兴县灰皮支移栽至装有试验病土的实验杯中，每个实验杯移栽1株，置于温室培养；

(3)培养20～25d后，从根系上用镊子取单胞囊接种至在无菌土中生长了3～5d的兴县灰皮支根系附近，每杯接种单个胞囊，温室培养20～25d；

(4)重复步骤(3)，单胞囊繁殖4次后，将从单个实验杯中搜集的第4代胞囊全部接种至另一杯在无菌土中生长3～5d的兴县灰皮支根系附近，温室培养20～25d后，得到纯化后的第5代胞囊；

(5)将从单个实验杯中搜集的第5代胞囊全部接种到在无菌土中生长3～5d的兴县灰皮支根系附近，温室培养20～25d后，得到纯化后第6代胞囊；

(6)重复步骤(5)，至得到纯化后的第8代或更高代胞囊，将从单个实验杯中得到的第8代或更高代胞囊全部接种至在无菌土中生长3～5d的感病品种Lee根系附近，实现胞囊的群体纯化及加代保存。

2.如权利要求1所述的提纯方法，其特征在于，所述病土的采集方法为：从受大豆胞囊线虫X12感染的大豆田块采集土壤表层以下2cm-6cm间的土壤，备用。

3.如权利要求1所述的提纯方法，其特征在于，所述温室培养条件为：白天16h与黑夜8h轮替；温度：白天27℃±1℃，黑夜24℃±1℃；湿度为70％±5％。

4.如权利要求1-3任一项所述的提纯方法在大豆胞囊线虫基因组测序中的应用。

5.如权利要求1-3任一项所述的提纯方法在大豆胞囊线虫致病基因研究及抗大豆胞囊线虫基因定位中的应用。

6.如权利要求1-3任一项所述的提纯方法在大豆抗性资源筛选及大豆抗病品种培育中表型鉴定筛选中的应用。