[发明专利]一种特异性靶向肿瘤EpCAM抗原的抗体及应用

权利要求书

1.一种特异性靶向肿瘤EpCAM抗原的嵌合抗原受体，包括胞外抗原识别结构域、跨膜结构域和胞内信号结构域，其特征在于，所述胞外抗原识别结构域包括VHH抗体或其片段，所述VHH抗体或其片段具有特异性靶向肿瘤EpCAM抗原的互补决定区CDR。

2.如权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述VHH抗体或其片段可选地选自Seq ID NO.1-9中的任一氨基酸序列构成的多肽或表位。

3.如权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述互补决定区CDR可选地选自SeqID NO.10-18中氨基酸序列的一个或多个。

4.如权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述跨膜结构域可选地包括CD3ζ、CD3ε、CD4、CD8α、CD28、CD5、CD16、CD9、CD22、CD33、CD27、CD37、CD45、CD64、CD80、CD86、CD127、CD137、CD134、CD152、CD154、PD-1或Dectin-1中的一个或多个。

5.如权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述胞内信号结构域可选地包括CD3ζ、CD27、CD28、CD30、CD137、CD134、CD154、Dectin-1、FcRγ或ICOS中的一个或多个。

6.如权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述VHH抗体或其片段的核苷酸可选地选自Seq ID NO.19-27中的任一序列。

7.包含权利要求1-6任一项所述的嵌合抗原受体的基因转移方式，其特征在于，所述基因转移方式可选地包含病毒载体、转座子系统、电穿孔法或CRISPR/Cas9基因编辑工具。

8.一种CAR-T细胞，其特征在于，表达权利要求1-6任一项所述的嵌合抗原受体。

9.如权利要求8所述的CAR-T细胞，其特征在于，表达的所述嵌合抗原受体的氨基酸序列如Seq ID NO.28-36任一项所示；或者，表达的所述嵌合抗原受体的核苷酸序列如Seq IDNO.37-45任一项所示。

10.一种CAR-NK细胞，其特征在于，表达权利要求1-6任一项所述的嵌合抗原受体。

11.如权利要求10所述的CAR-NK细胞，其特征在于，表达的所述嵌合抗原受体的氨基酸序列如Seq ID NO.28-36任一项所示；或者，表达的所述嵌合抗原受体的核苷酸序列如SeqID NO.37-45任一项所示。

12.一种抗肿瘤药物，其特征在于，含有权利要求8所述的CAR-T细胞和药学上允许添加的辅料和/或助剂。

13.如权利要求12所述的抗肿瘤药物，其特在于，所述肿瘤包括上皮细胞来源的实体肿瘤，且EpCAM表达为阳性。

14.如权利要求12所述的抗肿瘤药物，其特征在于，所述肿瘤包括上皮来源的恶性肿瘤和循环肿瘤细胞，以及肿瘤干细胞；或者，所述肿瘤包括肠癌、肺癌、卵巢癌、肝癌或胃癌。

15.权利要求1-6任一项所述的嵌合抗原受体的合成方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)构建Anti-EpCAM-VHH-CAR完整基因；(2)使用引物对Primer1和Primer2扩增所述Anti-EpCAM-VHH-CAR基因；(3)利用BamHI和EcoRI限制酶消化扩增出的基因序列并用病毒载体包装。

16.如权利要求15所述的合成方法，其特征在于，所述病毒载体包括慢病毒载体、腺病毒载体或反转录病毒载体。