[发明专利]一种测定血清中唾液酸含量的方法

说明书

本申请公开了一种测定血清中唾液酸含量的方法，包括：步骤S1：提供血清样本，血清样本包含游离唾液酸和缀合唾液酸；步骤S2‑1：对血清样本进行酸解，离心后得到缀合唾液酸的酸水解产物，干燥，加入内标物；和/或，步骤S2‑2：在血清样本中加入内标物，用有机溶剂进行蛋白沉淀，离心得到游离唾液酸的提取液，干燥；步骤S3：加入衍生试剂进行衍生，获得衍生产物；步骤S4：对衍生产物进行液相色谱质谱联用检测，得到唾液酸含量的测定结果。本申请的测定血清中唾液酸含量的方法，可用于准确测定复杂生物样本血清中的唾液酸。

技术领域

本申请涉及检测技术领域，具体涉及一种测定血清中唾液酸含量的方法。

背景技术

唾液酸(Sialic acid，SA)是一类九碳单糖的衍生物，多位于糖缀合物糖链的端基，广泛存在于动植物以及微生物体内。它在许多生理学和病理学包括癌细胞转移、病毒受体以及神经系统的发育都起到重要作用，并且在婴儿营养品、药物载体、化学合成抗流感药物的关键前体、流感病毒神经氨酸苷酶的高亲和力抑制剂等方面具有潜在的应用价值。

生物样本中的唾液酸由于其结构含大量羟基，不容易离子化，在进行质谱分析时具有一定的挑战性，通常需要富集纯化之后再采取衍生化方法进行检测，操作较为复杂。

发明内容

本申请的目的在于提供一种测定血清中唾液酸含量的方法，具有高准确性和高灵敏度。

为了达到上述目的，根据本申请的一方面，提供一种测定血清中唾液酸含量的方法，包括：

步骤S1：提供血清样本，血清样本包含游离唾液酸和缀合唾液酸；

步骤S2-1：对血清样本进行酸解，离心后得到缀合唾液酸的酸水解产物，干燥，加入内标物；和/或，

步骤S2-2：在血清样本中加入内标物，用有机溶剂进行蛋白沉淀，离心得到游离唾液酸的提取液，干燥；

步骤S3：加入衍生试剂进行衍生，获得衍生产物；

步骤S4：对衍生产物进行液相色谱质谱联用检测，得到唾液酸含量的测定结果。

可选的，在本申请的一些实施例中，唾液酸含量包括游离唾液酸含量和总唾液酸含量。

可选的，在本申请的一些实施例中，在步骤S2-1中，酸解所用的酸包括三氟乙酸、硫酸、盐酸或甲酸。

可选的，在本申请的一些实施例中，酸的浓度可以为1～3mol/L，也可以为1.5～2.5mol/L，优选的，酸的浓度为1mol/L。

可选的，在本申请的一些实施例中，在步骤S2-1中，内标物为尤罗索尼克酸，也可以选择同位素标记的N-乙酰神经氨酸或同位素标记的N-羟乙酰神经氨酸中的一种或多种。

可选的，在本申请的一些实施例中，在步骤S2-1中，内标物的浓度可以为300～700μg/mL，也可以为400～600μg/mL，优选地，内标物的浓度为500μg/mL。

可选的，在本申请的一些实施例中，在步骤S2-2中，有机溶剂包括乙腈或甲醇。

可选的，在本申请的一些实施例中，在步骤S2-2中，内标物为尤罗索尼克酸，也可以选择同位素标记的N-乙酰神经氨酸或同位素标记的N-羟乙酰神经氨酸中的一种或多种。

可选的，在本申请的一些实施例中，在步骤S2-2中，内标物的浓度可以为3000～7000ng/mL，也可以为4000～6000ng/mL，优选的，内标物的浓度为5000ng/mL。

可选的，在本申请的一些实施例中，在步骤S3中，衍生试剂包括吉拉德试剂P或吉拉德试剂T。

可选的，在本申请的一些实施例中，在步骤S3中，衍生的反应温度可以为50～80℃，也可以为55～75℃，优选的，衍生的反应温度为65℃。