[发明专利]一种温度响应型蛋白质印迹磁性纳米微球及其制备方法

权利要求书

1.一种温度响应型蛋白质印迹磁性纳米微球的制备方法，包括以下步骤：首先用共沉淀法合成磁性纳米材料，继而采用改进的stober法在磁性微球表面包裹二氧化硅保护层，进而在保护层表面引入卤原子；随后将引入卤原子的磁性微球、一定量N-异丙基丙烯酰胺、协助单体、交联剂、模板分子与10~100mL磷酸缓冲溶液加入三口烧瓶反应器，在4 ~37℃下超声分散自组装30~120min，氮气鼓泡20~180min除去体系中的氧气，最后在氮气氛围下加入催化剂，室温下机械搅拌聚合6 ~ 24h。

2.利用外加磁场收集合成的温度响应型蛋白质印迹磁性纳米微球。

3.用去离子水多次洗涤产物，除去未反应单体及杂质；用洗脱液去除模板分子得到蛋白质印迹纳米微球。

4.根据权利要求1所述的一种温度响应型蛋白质印迹磁性纳米微球，其特征在于：该微球以四氧化三铁纳米微球为核心，以温度响应共聚物为壳层。

5.壳层中含有N-异丙基丙烯酰胺、叔丁基丙烯酰胺、丙烯酸等氨基酸残基的互补官能团，具有与目标分子体积契合的三维立体结构。

6.随外部环境温度的改变，实现蛋白质分子的吸附、解吸；通过磁场变化实现分子印迹聚合物与蛋白质的分离。

7.根据权利要求1所述的一种温度响应型蛋白质印迹磁性纳米微球的制备方法，其特征在于：N-异丙基丙烯酰胺、协助单体、交联剂摩尔占比为94 ~ 75:5 ~ 20:1 ~ 5，模板蛋白用量是功能单体质量的5 ~ 40%；

根据权利要求1所述的一种温度响应型蛋白质印迹磁性纳米微球的制备方法，其特征在于：协助单体为甲基丙烯酸、N-叔丁基丙烯酰胺、丙烯酸、丙烯酰胺中的一种或几种的混合；

根据权利要求1所述的一种温度响应型蛋白质印迹磁性纳米微球的制备方法，其特征在于：交联剂为N,N'-亚甲基双丙烯酰胺、甲基丙烯酸乙二醇酯、三乙二醇二甲基丙烯酸酯、1,3-丁二醇二甲基丙烯酸酯、1,4-丁二醇二甲基丙烯酸酯、1,6-己二醇二甲基丙烯酸酯、双酚A二甲基丙烯酸酯中的一种或几种的混合；

根据权利要求1所述的一种温度响应型蛋白质印迹磁性纳米微球的制备方法，其特征在于：采用共沉淀法制备Fe3O4粒子，后以Fe3O4粒子为种子液表面包裹二氧化硅薄层，SiO2包裹后的磁性核心具有单分散超顺磁性，粒径是80 ~ 300nm；

根据权利要求1所述的一种温度响应型蛋白质印迹磁性纳米微球的制备方法，其特征在于：磁性核心用2-溴异丁酰溴功能化；

根据权利要求1所述的一种温度响应型蛋白质印迹磁性纳米微球的制备方法，其特征在于：分子印迹聚合物的聚合反应由磁性粒子表面引发；

根据权利要求1所述的一种温度响应型蛋白质印迹磁性纳米微球的制备方法，其特征在于：所用缓冲液是磷酸氢二钾、磷酸二氢钾体系，浓度是10 ~ 100mmoL/L，pH是6 ~ 8；

根据权利要求1所述的一种温度响应型蛋白质印迹磁性纳米微球的制备方法，其特征在于：所制备的分子印迹纳米微球在蛋白质富集、分离和纯化中的应用。