[发明专利]安石榴苷在抗日本脑炎病毒感染中的潜在应用

说明书

本发明提供了一种针对日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)中存在的，对日本脑炎病毒生长复制极其重要的酶，即非结构蛋白NS2B(H)‑NS3pro双组分蛋白酶的抑制剂，该抑制剂的名称为安石榴苷，对日本脑炎病毒中的NS2B(H)‑NS3pro的丝氨酸蛋白酶活性具有显著的抑制作用，因此本发明提供的抑制剂能够用来制备针对日本脑炎病毒中NS2B(H)‑NS3pro双组分蛋白酶的小分子抑制剂，有望成为抗日本脑炎病毒感染的潜在药物。

技术领域

本发明涉及药学的技术领域，具体说是安石榴苷在抗日本脑炎病毒感染中的应用。

背景技术

日本乙型脑炎(JE)是由日本脑炎病毒(JEV,Japanese encephalitis virus)引起的病毒性疾病，是目前全球最重要的病毒性脑炎，对人类的健康，特别是免疫性较低的儿童和青少年，具有极大的威胁。其主要由蚊子进行传播，猪和水禽类动物充当JEV的快速扩增宿主，造成全球每年将近有67,900例人类病例，其中有50％的病例在中国出现。由于目前并没有针对乙脑病毒的特效药，因此，一旦感染，脑炎患者的死亡率为30％。即便幸存，由于JEV对而大约50％的患者会出现永久性神经系统损伤，包括记忆丧失，认知性行为障碍，抽搐，严重者甚至会造成终身瘫痪。面对JEV的严重挑战，在JEV疫苗接种率不断提高的情况下，发病率仍然高居不下，是亚洲地区需要面对的公共卫生问题。除了人类健康外，日本脑炎病毒也给畜牧养殖业带来了极大挑战，JEV病毒感染对猪的影响尤其明显。虽然成年的养殖猪感染JEV后很少会出现症状性疾病，但它被认为是一个导致流产、死胎和造成幼猪出生缺陷的重大繁殖问题。被感染的小猪则会表现出致命的神经系统疾病。马也会被感染，导致非特异性症状，包括发热，但偶尔会导致明显的神经系统疾病，在极端情况下会导致死亡。因此，关于日本脑炎病毒的疫苗和抑制剂的研究在目前来说万分重要。

日本脑炎病毒的双组分蛋白酶NS2B(H)-NS3 pro负责将该病毒的多蛋白前体切割加工为参与病毒致病的成熟病毒蛋白。NS3蛋白N端的三分之一(180个残基)代表其蛋白酶结构域NS3(pro)，它在病毒繁殖过程中与C端三分之二部分的RNA解旋酶协同工作。NS3蛋白水解结构域包含H51、D75和S135的经典催化三联体，并且在NS2B/NS3多蛋白连接处的自催化蛋白水解切割导致NS2B和NS3形成非共价蛋白复合物。早期研究表明，NS2B的约35-48个氨基酸残基长的中央亲水区NS2B(H)直接与NS3(pro)相互作用，并促进NS3(pro)折叠成具有催化活性的构象。NS2B(H)-NS3对于包括日本脑炎病毒在内的黄病毒属病毒的复制，致病性以及相关蛋白质的加工成熟都起到不可或缺的作用，因此，NS2B(H)-NS3可作为研究日本乙型脑炎病毒的抑制剂的一个重要靶标。

安石榴苷，英文名是Punicalagin，是石榴汁中发现的抗氧化剂鞣花单宁，具有已知的抗增殖或抗血管生成特性，可对抗多种癌细胞系，包括白血病、神经胶质瘤和前列腺癌细胞。而且，安石榴苷水溶性好，人体容易吸收，摄入体内后，可以水解成小分子多酚类物质，所以安石榴苷的生物利用度相对于其他的石榴提取物更高。但至今，安石榴苷在抗日本脑炎病毒感染中的应用未见报道。

发明内容

针对相关技术中的问题，本发明提供安石榴苷在抗日本脑炎病毒感染中的应用。

本发明还提供了针对日本脑炎病毒双组分蛋白酶NS2B(H)-NS3 pro的抑制剂。

本发明所涉及安石榴苷CAS号为65995-63-3，购买于成都瑞芬思生物科技有限公司。在分子水平上，通过设立阴性对照，发现安石榴苷对日本脑炎病毒双组分蛋白酶NS2B(H)-NS3 pro有很好的抑制活性，因此该化合物有希望成为抑制日本脑炎病毒感染的潜在药物。