[发明专利]一种丙烯酰胺衍生物模拟表位肽及应用

说明书

本发明公开了一种丙烯酰胺衍生物模拟表位肽及应用。本发明制备得到的丙烯酰胺衍生物模拟表位肽是国内外首次报道的与丙烯酰胺衍生物抗体特异性结合模拟表位肽；利用本发明制备得到的展示模拟表位肽的噬菌体可以建立灵敏，快速的竞争型酶联免疫分析法；利用本发明制备得到的展示模拟表位肽的噬菌体构建的竞争型免疫分析方法用于检测丙烯酰胺，IC₅₀为5.88ng/mL，检测限为1.41ng/mL；基于本发明提供的发明制备得到的展示模拟表位肽的噬菌体建立的竞争型免疫分析方法对丙烯酰胺的结构类似物的交叉反应良好。

技术领域

本发明涉及食品安全技术领域，具体地，涉及一种丙烯酰胺衍生物模拟表位肽。

背景技术

丙烯酰胺(Acrylamide)是一种无色、无味的小分子有机物，具有良好的水溶性。丙烯酰胺广泛存在高温加工的淀粉类食品中，主要是由于食品制作过程中发生的美拉德反应，原料中天冬酰胺和还原糖是美拉德反应中丙烯酰胺形成的主要前体物质。近年来，大量研究表明丙烯酰胺具有神经毒性、遗传毒性、生殖毒性和潜在致癌性，可通过皮肤、黏膜、呼吸道、消化道和胎盘进入生物体内并蓄积，危害人类健康。欧盟风险评估报告，丙烯酰胺可诱导动物各种器官发生肿瘤，如口腔、甲状腺、乳腺、睾丸、子宫及脑下垂体肿瘤等。国际癌症研究机构(IARC)于1994年将丙烯酰胺列为2类致癌物(2A)。由于丙烯酰胺毒性强，在食品中分布较广，对人体健康造成极大威胁，因此对食品中丙烯酰胺的监测必不可少。

目前食品中丙烯酰胺的检测方法主要有高效液相色谱法，高效液相串联质谱法，气相色谱法，气相串联质谱法和基于特异性抗体的免疫分析方法等。例如：CN201110349769.0一种丙烯酰胺快速检测卡及其检测方法、CN202011219056.8一种基于上转换荧光纳米体系对烘焙食品中丙烯酰胺含量的检测方法、CN201510288951.8一种基于荧光分析的煎炸食品中丙烯酰胺的检测方法等。

其中，免疫分析方法具有成本低，分析快，灵敏度高等特点备受青睐。丙烯酰胺具有超低的分子量(71.08Da)，难以有效引起动物免疫应答，因而其高亲和力抗体几乎无法获得，至今对其进行高灵敏直接免疫检测未能突破。目前仅能基于检测其衍生物的方式进行检测，其检测全抗原在化学合成过程中反应步骤繁琐，制备过程需要使用大量的有毒标准品和有机溶剂，直接威胁操作人员身体健康，若化学合成过程中产生的废液处理不当，极易造成实验室及环境的二次污染。另外，化学合成检测全抗原时，副产物多，具有不可精准操控的特性，易导致检测全抗原批间差异大，造成检测方法的不稳定性。因此，研究高敏感无毒的小分子检测全抗原替代物，是建立环境友好型免疫分析的重要发展方向。近年来研究人员发现从多肽展示库中可淘筛到抗原模拟表位蛋白，成功代替了免疫分析方法中的完全抗原。模拟表位蛋白与传统化学合成的竞争物相比，具有获取快速简单，环保，灵敏度更高的优势，但是目前应用于丙烯酰胺分析检测的模拟表位蛋白尚未报道。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术的上述不足，提供一种丙烯酰胺衍生物模拟表位肽及应用。

本发明的第一个目的是提供一种丙烯酰胺衍生物的模拟表位肽。

本发明的第二个目的是提供一种编码丙烯酰胺衍生物的模拟表位肽的基因。

本发明的第三个目的是提供一种噬菌体。

本发明的第四个目的是提供另一种噬菌体。

本发明的第五个目的是提供一种检测丙烯酰胺的方法。

本发明的第六个目的是提供一种检测丙烯酰胺的试剂盒。

本发明的第七个目的是提供所述模拟表位肽、所述基因、所述噬菌体、和/或所述另一噬菌体任意一种或几种在制备检测占吨聚丙烯酰胺和/或丙烯酰胺的试剂盒中的应用。

本发明的第八个目的是提供所述模拟表位肽、所述基因、所述噬菌体、所述另一噬菌体、和/或所示的试剂盒任意一种或几种在检测占吨聚丙烯酰胺和/或丙烯酰胺中的应用。