[发明专利]一种罗布麻单宁酶全细胞催化剂工程菌株及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及生物工程技术领域，特别涉及一种罗布麻单宁酶全细胞催化剂工程菌株及其制备方法和应用。罗布麻单宁酶全细胞催化剂工程菌株包含SEQ ID NO：1所示的罗布麻单宁酶基因，可表达SEQ ID NO：2所示的罗布麻单宁酶。本发明从草本植物罗布麻体内克隆获得新的单宁酶基因，构建穿梭表达载体，并经诱导获得细胞壁表面锚定罗布麻单宁酶的全细胞催化剂工程菌株。该全细胞催化剂工程菌株具较高的耐热性，能催化表儿茶素没食子酸酯等单宁底物，并去除罗布麻茶苦涩味，明显改进罗布麻茶风味，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，特别涉及一种罗布麻单宁酶全细胞催化剂工程菌株及其制备方法和应用。

背景技术

野生的植物“罗布麻”(学名：A.venetum L.)具有清除血管壁沉积物、软化血管、降压清脂、常年稳压的作用。自古以来，罗布麻就在国人的生活中发挥着极为特殊的健康作用。根据《本草纲目》、《救荒本草》等古药典记载，罗布麻茶有平心悸、止眩晕、消痰止咳、强心利尿之功能，用开水冲泡后，色绿清淡，味道苦，涩，酸，可抑制血压升高，并对高血压患者的血压进行降低的作用，但罗布麻茶中单宁类物质含量过多，容易导致茶叶苦涩味加重，影响风味。

单宁是植物中普遍存在的酚类化合物，是植物在生存适应过程中为了抵御病毒、菌类等微生物或环境的胁迫而形成的一种次生代谢产物，它们广泛地积累于茶叶、水果、蔬菜等各种植物性食品中，是决定涩味的主要化合物。长期以来，有关控制植物单宁化合物的合成及水解途径的关键基因尚不清楚，成为国内外植物界高度关注的研究热点。目前，还未见罗布麻中单宁酶(Tannse,EC3.1.1.20,TA)及其基因和应用的报道。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种罗布麻单宁酶全细胞催化剂工程菌株及其制备方法和应用。该全细胞催化剂工程菌株能催化水解表儿茶素没食子酸、没食子酸甲酯、没食子酸酰基葡萄糖、没食子酸丙酯等单宁底物，改善罗布麻茶风味。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种罗布麻单宁酶基因，该罗布麻单宁酶基因为SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。

本发明还提供了一种罗布麻单宁酶基因，该罗布麻单宁酶基因为与SEQ ID NO：1所示核苷酸序列同源性达80％以上的核苷酸序列。

本发明还提供了一种罗布麻单宁酶，该罗布麻单宁酶为SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。

本发明还提供了一种重组载体，重组载体包含上述罗布麻单宁酶基因和穿梭载体。

在本发明中，穿梭载体为pYD1。

本发明还提供了一种罗布麻单宁酶全细胞催化剂工程菌株，该工程菌株包含上述重组载体和基础菌株。

在本发明中，基础菌株为酿酒酵母。

本发明还提供了该罗布麻单宁酶全细胞催化剂工程菌株的制备方法，包括以下步骤：

步骤一、合成SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列；

步骤二、将SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列插入穿梭载体，得到重组载体；

步骤三、将重组载体转入基础菌株，得到重组菌株；

步骤四、将重组菌株进行诱导表达，获得细胞壁表面锚定氨基酸序列如SEQ IDNO：2所示罗布麻单宁酶的全细胞催化工程菌株。

本发明还提供了该罗布麻单宁酶全细胞催化剂工程菌株在制备罗布麻茶中的应用。

本发明还提供了一种罗布麻茶，其原料包括罗布麻叶和罗布麻单宁酶全细胞催化剂工程菌株。