[发明专利]一株分泌抗菌核净单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用

说明书

本发明公开了一株分泌抗菌核净单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，该单克隆抗体杂交瘤细胞株的保藏名为单克隆细胞株SLS 2G5，保藏编号为CGMCC No.20792。以1‑(3，5‑二氯苯基)‑1H‑吡咯‑2，5‑二酮(Done)与3‑巯基丙酸乙酯的加成反应水解产物PD为半抗原，将半抗原与载体蛋白偶联制备免疫原PD‑BSA。对小鼠进行免疫原PD‑BSA注射免疫后，再通过PEG方法与骨髓瘤细胞融合，经过间接竞争酶联免疫法的筛选和五次亚克隆，得到本发明的单克隆抗体杂交瘤细胞株。此细胞株分泌的单克隆抗体可制成菌核净检测盒，对菌核净具有较好亲和力和检测灵敏度，可用于食品中菌核净残留量的免疫检测。

技术领域

本发明属于食品安全免疫检测技术领域，具体涉及一株分泌抗菌核净单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。

背景技术

菌核净(dimethachlone，DMT)属于二羰基亚胺类广谱杀菌剂，具有低毒、高效、持效期长等优势，广泛应用于防治水稻纹枯病，油菜、向日葵、大豆菌核病和烟草赤星病。农药使用量的增加不仅增加了人类通过食物链接触农药的风险，而且对环境和非目标生物产生了毒性影响。人体可以通过摄入食物、水果和蔬菜、吸收皮肤化学物质和吸入灰尘颗粒暴露于菌核净杀菌剂。因此，建立快速有效的检测菌核净含量的方法具有重要意义及市场价值。

目前的检测方法包括仪器分析法和免疫分析法。仪器分析法如高效液相色谱法([1]东保柱，王振，景岚，周洪友.HPLC法同时检测土壤中多菌灵、菌核净、速克灵、咪鲜胺4种杀菌剂[J].农药，2016，55(03)：205-207.)、气相色谱串联质谱法([2]刘建平，骆洪，连海飞，崔艳，聂晶.QuEChERS法萃取-气相色谱-三重四级杆串联质谱法检测大葱等鳞茎类蔬菜中6种杀菌剂的分析方法[J].分析仪器，2020(06)：40-45.)检测范围在0.04～10.0μg mL^-1。由于对样品前处理繁琐，干扰物较多及仪器工作条件的限制，同时对操作人员的技术要求较高，因此仪器方法并不适用于现场检测。

免疫分析方法相对于仪器检测方法，具有低成本、高通量、高灵敏、对技术人员要求低等特点，因此适用于大量样品的快速筛查。因此免疫检方法对菌核净的检测具有重要意义。刘蓉蓉于2009年至2012年先后报道了针对菌核净的多克隆抗体制备([3]刘媛，刘贤金，张存政，刘蓉蓉.菌核净的多克隆抗体及其制备和应用[P].江苏：CN101691404A，2010-04-07.)，及时间分辨荧光免疫检测([4]刘媛，刘蓉蓉，刘贤金，方敦煌，宋春满，HuovinenTuomas，Vehni inen Markus，L vgren Timo.时间分辨荧光免疫分析方法检测烟草中菌核净残留[J].分析化学，2012，40(07)：1114-1117；[5]刘媛，刘贤金，张霄，王冬兰.由间接竞争时间分辨荧光免疫分析体系检测烟草中菌核净残留的方法[P].江苏：CN102590499A，2012-07-18.)，但检测灵敏度均不高，其中灵敏度最优的为间接竞争时间分辨荧光免疫分析，IC₅₀为32ng mL^-1。

酶联免疫法(ELISA)是一种低成本、快速且便携的免疫学检测方法，检测时对样本的纯度要求不高而且操作简便，适用于大量样本的现场快速检测出结果。建立高效的免疫学检测方法，筛选高特异性的单克隆抗体是其重要前提，因此，开发一种针对菌核净的高效灵敏的检测方法是亟待解决的问题。

发明内容

发明目的：为了克服现有技术中存在的不足，本发明提供一株分泌菌核净单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，由该细胞株分泌的抗体针对菌核净具有较高的检测灵敏度，可以用来建立针对菌核净的免疫学检测方法。

技术方案：为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

本发明的一个目的是，提供一株分泌菌核净单克隆抗体的杂交瘤细胞株，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏名为单克隆细胞株SLS 2G5，保藏编号为CGMCC No.20792，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏日期2020年09月27日。