[发明专利]一种马铃薯试管苗限制生长保存方法

说明书

本发明涉及离体试管苗保存技术领域，公开了一种马铃薯试管苗限制生长保存方法，包括以下步骤：(1)组织培养：将马铃薯无菌试管苗在培养温度20～25℃、光照强度3000～4000lx、光周期为光照16h/黑暗8h的条件下，接入培养基中分别培养1周；(2)低温锻炼：选择步骤(1)中生长健壮马铃薯无菌试管苗接入专用保存袋，培养温度和光照时间为20℃光照8h、4℃黑暗16h的条件下低温锻炼1～2周；(3)限制生长：选择步骤(2)中生长健壮马铃薯无菌试管苗接入专用保存袋，在4℃无光照的条件下保存；该保存方法基于组织培养技术，马铃薯试管苗的保存期可达2年，形成低维护、低消耗、更长久的适于马铃薯中长期保存的技术。

技术领域

本发明涉及离体试管苗保存技术领域，具体涉及一种马铃薯试管苗限制生长保存方法。

背景技术

马铃薯(Solanum tuberosum L.)为茄科茄属一年生的双子叶草本植物，共有2000余种，别名土豆、洋芋、山药蛋、馍馍蛋、地蛋、荷兰薯等。起源于拉丁美洲秘鲁和玻利维亚等国的安第斯山脉高原地区，是世界上种植和食用国家最多的作物，也是在全球经济中继水稻、小麦和玉米之后的第四大粮食作物。16世纪，西班牙和英国的探险家分别从拉丁美洲将马铃薯带回本国种植，而后传入意大利和欧洲各地。在中国马铃薯有400多年的栽培历史，但我国的马铃薯种质资源较为有限。马铃薯性喜温凉，喜光，耐干旱，由于其生长周期短，单位面积产量高，块茎营养丰富，用途广泛(既可作蔬菜和经济作物)，又具有很强的抗逆性，分布范围极广。马铃薯具有较高的营养价值，含有大量的优质淀粉、维生素、矿物质、膳食纤维和蛋白质等，能满足人体所需营养的95％，在日常生活膳食结构中作为主要食物占有十分重要的地位，尤其是在欧美等温带国家

马铃薯种质资源目前主要采用异位保存中的田间圃位保存和试管苗保存。田间圃位保存时，易受环境的影响而导致种质消失，也容易受到病毒的侵害，使病毒大量积累，导致品种退化，产量降低。试管苗保存占地面积小、不易受自然灾害影响，便于种质资源交换及运输等优点，但需要频繁继代，且经过多次继代培养后面临发生变异、退化现象等威胁。

目前在试管苗的限制生长保存中，采取的主要技术措施有：改变培养保存环境、调整培养基养分水平、添加渗透性化合物和生长抑制剂等。每个作物生长和保存具有一定的特性，因此对每种作物适宜的保存方法需要进行研发和优化。现有的马铃薯试管苗限制生长/缓慢保存技术，有的报道通过降低保存温度将试管苗保存在试管内，延长保存时间18个月。有报道通过在培养基中添加生长抑制剂延长保存时间12个月，但长期使用生长抑制剂有可能会造成植物发育不良、生长异常，也有可能会导致材料对生长抑制剂产生抗性或耐受力的选择。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种马铃薯试管苗限制生长保存方法，该保存方法基于组织培养技术，马铃薯试管苗的保存期可达2年，形成低维护、低消耗、更长久的适于马铃薯中长期保存的技术。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种马铃薯试管苗限制生长保存方法，包括以下步骤：

(1)组织培养：将马铃薯无菌试管苗在培养温度20～25℃、光照强度3000～4000lx、光周期为光照16h/黑暗8h的条件下，接入培养基中分别培养1周；

(2)低温锻炼：选择步骤(1)中生长健壮马铃薯无菌试管苗接入专用保存袋，培养温度和光照时间为20℃光照8h、4℃黑暗16h的条件下低温锻炼1～2周；

(3)限制生长：选择步骤(2)中生长健壮马铃薯无菌试管苗接入专用保存袋，在4℃无光照的条件下保存；马铃薯等温带作物的试管苗培养保存条件低于细胞最佳生长的温度时，将减缓或降低细胞生长的代谢活动，降低培养物保存温度，结合降低光照强度，可延长保存时间。

作为优选，步骤(1)中马铃薯无菌试管苗的苗龄为1～2周。

作为优选，步骤(1)中培养基为MS+30g/L蔗糖+8g/L琼脂，pH为5.8。