[发明专利]一种区分非洲猪瘟野毒与CD2V缺失毒的检测试纸条及其制备与检测方法

权利要求书

1.一种区分非洲猪瘟野毒与CD2V缺失毒的检测试纸条，其特征在于，所述检测试纸条包括吸水纸、硝酸纤维素膜、胶体金垫、滤血膜和样品垫；

所述硝酸纤维素膜上依次间隔设置有C线、T1线和T2线，所述C线上固定有抗鸡IgY，T1线固定有PP62抗原，T2线固定有P30抗原。

2.根据权利要求1所述的区分非洲猪瘟野毒与CD2V缺失毒的检测试纸条，其特征在于，所述胶体金垫包被有PP62抗原、P30抗原和抗鸡IgY的标记物。

3.如权利要求1-2任意所述的区分非洲猪瘟野毒与CD2V缺失毒的检测试纸条的制备方法，其特征在于，所述制备方法具体包括以下步骤：

将样品垫置于样品垫处理液中浸泡4-7min后进行干燥备用，所述样品垫处理液以PB缓冲液和氯化钠溶液为母液，加入络蛋白、十二烷基硫酸钠、吐温20和蔗糖配置而成；

将滤血膜置于滤血膜处理液中浸泡4-7min后干燥备用，所述滤血膜处理液是以十二水磷酸氢二钠和氯化钠为母液，加入蔗糖、抗血红细胞抗体配置而成；

配置抗鸡IgY溶液、PP62抗原溶液和P30抗原溶液，并将所述溶液抗鸡IgY溶液、PP62抗原溶液和P30抗原溶液分别在硝酸纤维素膜上划线并干燥获得含有C线、T1线和T2线的硝酸纤维素膜；

配置胶体金，分别取三份胶体金，分别加入碳酸钾缓冲液，再分别加入PP62、P30抗原和抗鸡IgY，充分混合后加入BSA溶液进行封闭并反应，离心后除去上清液，加入悬浮液悬浮混匀获得PP62抗原悬浮液、P30抗原悬浮液和内参抗体悬浮液，将所述PP62、P30抗原悬浮液混合后，再加入内参抗体悬浮液混匀并涂覆在玻璃纤维板上，干燥获得胶体金垫；

将吸水纸、含有C线、T1线和T2线的硝酸纤维素膜、处理后的滤血膜、胶体金垫和处理后的样品垫按顺序组装好并切条，加入干燥剂获得检测试纸条。

4.根据权利要求3所述的区分非洲猪瘟野毒与CD2V缺失毒的检测试纸条的制备方法，其特征在于，所述样品处理液的配方为：

0.02M PB缓冲液和9g/L的氯化钠溶液为母液，加入0.5％酪蛋白，0.05％SDS(十二烷基硫酸钠)，0.05％的吐温20，5％蔗糖，配制1L。

5.根据权利要求3所述的区分非洲猪瘟野毒与CD2V缺失毒的检测试纸条的制备方法，其特征在于，所述滤血膜处理液的配方为：

十二水磷酸氢二钠5.8g/L和8g/L的氯化钠溶液，5％蔗糖，0.5mg/ml抗红细胞抗体配制25ml。

6.根据权利要求3所述的区分非洲猪瘟野毒与CD2V缺失毒的检测试纸条的制备方法，其特征在于，所述胶体金的制备方法具体包括：

取金氯酸水溶液加热至沸腾，1-3min钟后边搅拌边加入柠檬酸三钠水溶液，继续煮沸6-10min，冷却后加入蒸馏水定容获得胶体金溶液。

7.根据权利要求3所述的区分非洲猪瘟野毒与CD2V缺失毒的检测试纸条的制备方法，其特征在于，所述胶体金垫制备过程中，所述碳酸钾缓冲液的浓度为0.2mol/L，所述PP62和P30抗原用量与碳酸钾缓冲液的用量的比值为：(3-10)ug：(2-8)ul；所述抗鸡IgY的用量与与碳酸钾缓冲液的用量的比值为：(2-4)ug：(2-5)ul。

8.根据权利要求3所述的区分非洲猪瘟野毒与CD2V缺失毒的检测试纸条的制备方法，其特征在于，所述悬浮液配方为：

十二水磷酸氢二钠0.6g、柠檬酸0.4g、酪蛋白钠0.4g、月桂醇聚氧乙烯醚0.3g、蔗糖10g、PEG200000.2g、吐温20千分之五，定容至200ml。