[发明专利]一种用植物枝条诱导不含内生菌嫩芽的方法

说明书

本发明公开了一种用植物枝条诱导不含内生菌嫩芽的方法，属于植物组织培养领域。该方法包括：(1)选取二年生以上植物枝条，用自来水彻底洗净后晾干；(2)晾干的植物枝条底端浸泡在生长溶液中静置处理1‑3h；其中生长溶液是将1‑萘乙酸与乙醇按照(0.5‑2.5g)：(100‑300mL)配比溶解后，再用蒸馏水稀释而成；(3)配制培养液，加入氨苄青霉素和庆大霉素溶液，将步骤(2)浸泡后的枝条转入培养液中，光照/黑暗交替密闭培养，获取不含内生菌嫩芽。该方法简单易操作，节省时间和成本，提高了出芽数量和质量，生产出不含内生菌的嫩芽，为植物组织培养提供大量外植体。

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，特别是涉及一种用植物枝条诱导不含内生菌嫩芽的方法。

背景技术

植物组织培养的材料几乎包括了植物体的各个部位，如嫩芽、叶、子叶、茎段、鳞茎、花瓣和花药等。嫩芽不仅生长速度快，繁殖率高，不容易发生变异，而且是获得脱毒苗木的有效途径。因此，嫩芽是植物组织培养中常用的外植体。然而，若从野外直接采集嫩芽作外植体进行组培操作时，往往会遇到以下几个突出问题：(1)植物抽芽时间较短，从野外采集嫩芽极易错过最佳取样时间；(2)野外采集的嫩芽长时间运输后活性下降，组培效果不理想；(3)野外采集的嫩芽只能用一次，一旦不成功，又要再次采集，工作量大；(4)野外采集的嫩芽里内生菌较多，消毒困难，污染率高。

污染是植物组培过程中经常出现的问题，植物组织一旦污染，势必导致组培的失败。污染途径可分为外植体引入和非外植体引入。外植体引入的主要原因是外植体表面消毒不彻底或外植体内生菌较多；而非外植体引入主要原因有：接种室或超净工作台不清洁、接种工具带菌或接种人员操作不规范等。

植物内生菌是指能够进入活体植物组织内或细胞间,但不引起植物组织明显变化的微生物。内生菌普遍存在于野外生长的植物组织中,且难以用常规方法彻底清除，所以，利用植物组织进行离体培养时,通常会遇到内生菌引起的污染。

目前，从野外采集枝条，在室内人工诱导不含内生菌的嫩芽方法尚无报道,因此亟待开发一种批量获得不含内生菌嫩芽的诱导方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种用植物枝条诱导不含内生菌嫩芽的方法，以解决上述现有技术存在的问题，该方法简单易操作，节省时间和成本，并且提高了出芽数量和质量，生产出不含内生菌的嫩芽，为蓝果树组织培养提供大量外植体。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种用植物枝条诱导不含内生菌嫩芽的方法，包括以下步骤：

(1)选取两年生以上植物枝条，洗净晾干；

(2)晾干后的植物枝条，底端向下，并将所述植物枝条底端4-6cm浸泡在生长溶液中静置处理1-3h；

其中所述生长溶液是将1-萘乙酸(NAA)与乙醇按照(0.5-2.5g)：(100-300mL)配比溶解后，用蒸馏水稀释而成；

(3)配制培养液，加入氨苄青霉素和庆大霉素溶液，将步骤(2)浸泡后的枝条转入培养液中，光照/黑暗交替密闭培养，获取不含内生菌的嫩芽；

其中所述培养液为：1/2MS培养基+8.5-12g/L磷酸二氢钾，pH调至5.8-6.2。

优选的是，步骤(1)中，所述植物枝条为早春植物抽芽长叶前选取的越冬休眠枝条。

优选的是，步骤(1)中，用清水对所述植物枝条进行清洗干净后，将其放置于背阳通风处摊开晾干30-40min。

优选的是，步骤(2)中，所述生长溶液是将1-3g 1-萘乙酸用100-300mL乙醇溶解，然后再用蒸馏水定容至2.5-5.0L得到。