[发明专利]BmSPI38突变体及其应用

权利要求书

1.BmSPI38突变体在制备蛋白酶抑制剂中的应用，其特征在于，野生型BmSPI38的氨基酸序列由SEQ ID NO.1中第23位至第80位组成，所述BmSPI38突变体为：

1）对枯草杆菌蛋白酶和弹性蛋白酶抑制活性增强的BmSPI38突变体，所述突变体是将SEQ ID NO.1所示第54 位的甘氨酸突变为精氨酸、赖氨酸、丝氨酸、苏氨酸、丙氨酸或谷氨酰胺；

2）同时具有枯草杆菌蛋白酶、弹性蛋白酶和胰蛋白酶抑制活性的BmSPI38突变体，所述突变体是将SEQ ID NO.1所示第54 位的甘氨酸突变为精氨酸或赖氨酸。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，是利用定点突变引物对如SEQ ID NO.2所示野生型BmSPI38的基因序列进行定点突变，得到所述BmSPI38突变体。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述BmSPI38突变体的构建方法包括如下步骤：

S1、设计定点突变引物，使上下游引物都带有突变位点；

S2、以BmSPI38-p28载体作为模板，使用DNA聚合酶，用特异性突变引物进行 PCR 反应扩增，反应产物用琼脂糖凝胶电泳检测；S3、利用 Dpn I 进行酶切反应处理 PCR 产物；

S4、将酶切反应处理的PCR 产物转化入Trans1-T1感受态细胞，挑选阳性克隆进行测序验证，然后提取突变质粒；

S5、将突变质粒转入宿主表达菌株中，诱导表达得到BmSPI38突变体。