[发明专利]SLC35E2B基因敲除小鼠动物模型的构建方法和应用在审
| 申请号： | 202111081233.5 | 申请日： | 2021-09-15 |
| 公开（公告）号： | CN113699152A | 公开（公告）日： | 2021-11-26 |
| 发明（设计）人： | 王晓华;苏云志;颜韵灵 | 申请（专利权）人： | 南方医科大学皮肤病医院（广东省皮肤病医院;广东省皮肤性病防治中心;中国麻风防治研究中心） |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/85;C12N15/89;A01K67/027;A61K49/00 |
| 代理公司： | 广州帮专高智知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 44674 | 代理人： | 颜德昊 |
| 地址： | 510000*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | slc35e2b 基因 小鼠 动物 模型 构建 方法 应用 | ||
1.SLC35E2B基因敲除小鼠动物模型的构建方法，其特征在于，基于CRISPR/Cas9基因敲除技术构建得到，包括以下步骤：
(1)根据SLC35E2B基因序列设计SLC35E2B小鼠待敲除基因的两对特异性靶点gRNA1和gRNA2、gRNA3和gRNA4，并与Cas9核酸酶体外转录成mRNA；
(2)将两对特异性靶点gRNA1和gRNA2、gRNA3和gRNA4和mRNA一起显微注射入小鼠受精卵内，显微注射后的受精卵移植至代孕母鼠输卵管内；
(3)待产出小鼠后继续传代培养，经基因型鉴定，得到稳定遗传的SLC35E2B基因敲除小鼠动物模型；
其中，所述gRNA1的靶点序列如SEQ ID NO:1所示，所述gRNA2的靶点序列如SEQ ID NO:2所示，所述gRNA3的靶点序列如SEQ ID NO:3所示，所述gRNA4的靶点序列如SEQ ID NO:4所示。
2.根据权利要求1所述SLC35E2B基因敲除小鼠动物模型的构建方法，其特征在于，步骤(3)中，所述基因型鉴定为：若为一个680bp的条带，为阳性纯合子；若为两个931bp和680bp的条带，为阳性杂合子；若为一个931bp的条带，为野生型对照。
3.根据权利要求1或2所述SLC35E2B基因敲除小鼠动物模型的构建方法，其特征在于，步骤(3)中，显微注射后的受精卵移植至代孕母鼠输卵管内，产出小鼠，即为F0代小鼠；提取F0代小鼠尾部DNA，PCR扩增并将产物测序，阳性小鼠与野生型异性小鼠交配获得F1代阳性杂合子小鼠，F1代阳性杂合子小鼠杂交获得F2代阳性纯合子小鼠。
4.一种SLC35E2B基因敲除小鼠动物模型，其特征在于，通过权利要求1至3任一项所述SLC35E2B基因敲除小鼠动物模型的构建方法得到。
5.权利要求4所述的SLC35E2B基因敲除小鼠动物模型在银屑病或分枝杆菌感染性疾病研究中的应用。
6.SLC35E2B基因在制备和筛选治疗银屑病药物中的应用。
7.SLC35E2B基因在制备和筛选治疗分枝杆菌感染性疾病药物中的应用。
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