[发明专利]BmSPI39突变体及其应用

权利要求书

1.BmSPI39突变体在制备蛋白酶抑制剂中的应用，其特征在于，所述蛋白酶为枯草杆菌蛋白酶和弹性蛋白酶；BmSPI39是由SEQ ID NO.1中第25位至第98位组成；

所述BmSPI39突变体是将BmSPI39氨基酸列中如SEQ ID NO.1所示第56 位的丙氨酸突变为丝氨酸、苏氨酸、谷氨酰胺、酪氨酸、甲硫氨酸、亮氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、组氨酸、半胱氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、异亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、脯氨酸或甘氨酸。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，是利用定点突变引物对如SEQ ID NO.2所示野生型BmSPI39的基因序列进行定点突变，得到所述BmSPI39突变体。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述BmSPI39突变体的构建方法，包括如下步骤：

S1、设计定点突变引物，使上下游引物都带有突变位点；

S2、以BmSPI39-p28载体作为模板，使用DNA聚合酶，用特异性突变引物进行 PCR 反应扩增，反应产物用琼脂糖凝胶电泳进行检测；S3、利用 Dpn I 进行酶切反应处理 PCR 产物；

S4、将酶切反应处理的PCR 产物转化入Trans1-T1感受态细胞，挑选阳性克隆进行测序验证，提取突变质粒；

S5、将突变质粒转入宿主表达菌株中，诱导表达得到BmSPI39突变体。