[发明专利]一种抗原融合蛋白及其编码基因和应用

说明书

本发明公开了一种抗原融合蛋白及其编码基因和应用。该抗原融合蛋白包括通过连接肽连接的维氏气单胞菌LamB蛋白、拟态弧菌TolC蛋白和鮰爱德华氏菌OmpN3，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明制备了BL21(DE3)‑pET30a‑LamB‑TolC‑OmpN3表达菌株，通过培养该菌株，可获得同时具备3种细菌的抗原融合蛋白，获得的蛋白易于纯化，产量高且稳定性好，可用于后续三联亚单位疫苗和诊断试剂盒开发。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种抗原融合蛋白及其编码基因和应用。

背景技术

维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)，属气单胞菌科，气单胞菌属，是一种革兰氏阴性短杆菌。该菌是一种机会性人鱼共患致病菌，是水生动物疾病常见的致病菌。拟态弧菌(Vibrio mimicus)，属弧菌科、弧菌属，是一种革兰氏阴性弧菌菌，也是一种人鱼共患病，可感染多种经济鱼类，包括：草鱼(Ctenopharyngodon idella)、黄颡鱼(Pelteobagrusfulvidraco)、南方鲇(Silurus meridionalis)、锦鲤(Cyprinus carpio)等。由V.mimicus感染引起鱼病的死亡率高是制约水产养殖业发展的瓶颈。鮰爱德华氏菌(Edwardsiellaictaluri)属肠杆菌科，爱德华氏菌属，是一种革兰氏阴性短杆菌。该菌首次分离至患病斑点叉尾鮰，之后主要在鲇形目中爆发，对一些非鲶形目鱼类也具有致病性。目前这三种菌仍是引起水生动物疾病，造成鱼体死亡的重要病原。开发这三种菌的诊断方法和疫苗对于保障水生动物绿色健康发展具有重要意义。

外膜蛋白(Out membrane protein,Omp)是革兰氏阴性菌外膜的重要组成成分，主要参与了维持菌体结构、物质运转以及对宿主的致病致病等过程。由于Omp通常直接暴露于宿主的免疫系统中，易于被免疫系统识别而产生有效的免疫反应，因此Omp被认为是开发诊断方法和渔用疫苗的候选材料。麦芽糖孔蛋白(LamB)是A.veronii重要的粘附相关毒力因子，重组蛋白LamB具有较好的免疫原性和保护作用，是A.veronii外膜蛋白基因工程疫苗的候选蛋白。易位蛋白(TolC)是V.mimicus外膜蛋白中将各种极性分子(包括氨基酸、蛋白质、糖类和离子)转位通过膜(包括质膜和细胞器膜)的一类蛋白质，具有保守性好，抗原性强的特点。外膜蛋白OmpN3(outer membrane protein N3)是E.ictaluri表面蛋白中保守性好，抗原性强的一种蛋白，可作为E.ictaluri基因工程疫苗的候选蛋白。这三种蛋白均被认为具有良好的保守性和抗原性，可作为疫苗候选。因此，融合这三种蛋白将对三联疫苗具有重要意义。

发明内容

针对现有技术中的上述不足，本发明提供一种抗原融合蛋白及其编码基因和应用，本发明制备得到的蛋白产量高、成本低、操作简单、免疫原性好可为三联亚单位疫苗的研发的蛋白候选。

为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种抗原融合蛋白，该抗原融合蛋白包括通过连接肽连接的维氏气单胞菌LamB蛋白、拟态弧菌TolC蛋白和鮰爱德华氏菌OmpN3，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

进一步地，维氏气单胞菌LamB蛋白、拟态弧菌TolC蛋白和鮰爱德华氏菌OmpN3之间的连接肽的氨基酸序列为：GGGSGGGS。

一种编码上述抗原融合蛋白的基因，该基因为经大肠杆菌密码子优化后的基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

进一步地，基因的5’设计有酶切位点Nde I(CATATG)，基因的3’端设计有酶切位点Hind III(AAGCTT)。

一种质粒，包括上述基因。

一种菌株，包括上述基因，或质粒。

一种三联疫苗，包括上述抗原融合蛋白。