[发明专利]抗Ⅰ群4型禽腺病毒单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及检测试剂盒的应用

说明书

本发明公开了一种抗Ⅰ群4型禽腺病毒单克隆抗体。本发明还公开了Ⅰ群4型禽腺病毒抗体检测试剂盒，以及上述单克隆抗体在制备诊断或治疗Ⅰ群4型禽腺病毒病的产品中的应用。本发明利用抗Ⅰ群4型禽腺病毒的单克隆抗体制备的检测Ⅰ群4型禽腺病毒抗体的阻断ELISA试剂盒，特异性强、敏感性高，可以对Ⅰ群4型禽腺病毒抗体进行快速定性和定量检测，在由Ⅰ群4型禽腺病毒引起的禽心包积水肝炎综合征的诊断及抗体检测方面具有很好的应用前景。

技术领域

本发明涉及兽用诊断生物制品技术领域，尤其涉及一种抗Ⅰ群4型禽腺病毒单克隆抗体、其杂交瘤细胞株、以及包含该单克隆抗体的Ⅰ群4型禽腺病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒。

背景技术

I群禽腺病毒(FAdV)分为五亚群(A-E),12种血清型。FAdV-I的五亚群包括A型(FAdV-1)，B型(FAdV-5)，C型(FAdV-4和-10)，D型(FAdV-2,-3,-9和-11)和E(FAdV-6,-7,-8a和-8b)。在2015年之前禽腺病毒已全球传播，FAdV感染主要是亚临床症状或无毒性。然而，从2015年夏天起，中国许多省份出现了高致病性血清型病毒(FAdV-4)的爆发。这些爆发通常多发生在肉雏鸡和蛋鸡中，与包涵体肝炎(IBH)，心包积液综合征(HPS)，腺胃糜烂和溃疡有关。与之前的FAdV疫情引起的轻度疾病相比，过去两年来严重的FAdV感染导致家禽业巨大的经济损失。目前，在我国分离的毒株有FAdV-4、8a、8b、10及11等血清型，FAdV-1、 2、4、8等多种血清型并与自然暴发的肝炎-心包积水综合症有关，据国家肉鸡产业技术体系报道，我国流行毒株中FAdV-4占90％，并且该型病毒已经成为危害养禽业健康发展的最为重要的传染病病原之一，因此，针对FAdV-4开发特异性的诊断试剂盒对于防控该病的流行极为重要。

发明内容

本发明要解决目前市场上缺乏针对Ⅰ群4型禽腺病毒抗体检测产品的技术问题，提供一种抗Ⅰ群4型禽腺病毒的特异性单克隆抗体，该单克隆抗体可用于快速、灵敏地检测Ⅰ群4 型禽腺病毒，对Ⅰ群4型禽腺病毒的临床诊断及其疫苗抗体免疫水平评估、疫病监测与净化提供很好的方法和试剂盒。

为了解决上述技术问题，本发明通过如下技术方案实现:

在本发明的一个方面，提供了一种抗Ⅰ群4型禽腺病毒单克隆抗体。

优选的，所述单克隆抗体与Ⅰ群4型禽腺病毒特异性结合,并具有阻断或竞争的活性。

更优选的，所述单克隆抗体由保藏号为CCTCC NO：C2021114的杂交瘤细胞株产生。

所述单克隆抗体的抗体亚类为为IgG2a，其轻链为к链。

在本发明的另一方面，还提供了一种分泌产生上述单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

优选的，该杂交瘤细胞株的保藏号为CCTCC NO：C2021114。

在本发明的另一方面，还提供了一种Ⅰ群4型禽腺病毒ELISA抗体检测试剂盒，包含上述的单克隆抗体。

优选的，本发明试剂盒还包含灭活后纯化的Ⅰ群4型禽腺病毒包被的96孔ELISA酶联反应板(抗原包被板)、Ⅰ群4型禽腺病毒抗原、样品稀释液、单克隆抗体、酶标二抗、TMB 底物溶液、终止液、阳性对照血清、阴性对照血清、10倍浓缩洗涤液、封板膜和试剂盒说明书。其中酶标二抗为羊抗鼠酶标二抗。

所述试剂盒采用阻断ELISA方法检测Ⅰ群4型禽腺病毒抗体，包括以下步骤：

用纯化的灭活Ⅰ群4型禽腺病毒包被ELISA酶标板；

将待测血清样品与包被抗原作用后，依次加入权利要求1或2所述的单克隆抗体、酶标二抗、显色液和终止液；