[发明专利]免纯化的活性蛋白表达干燥方法及大规模蛋白突变体库筛选方法在审
| 申请号： | 202111069959.7 | 申请日： | 2021-09-13 |
| 公开（公告）号： | CN113832175A | 公开（公告）日： | 2021-12-24 |
| 发明（设计）人： | 宋东亮;马海玲;江翱;陈晶晶;孙晓亮;曹振 | 申请（专利权）人： | 翌圣生物科技（上海）股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N9/12;C12Q1/48 |
| 代理公司： | 苏州根号专利代理事务所(普通合伙) 32276 | 代理人： | 朱华庆 |
| 地址： | 200120 上海市浦*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 纯化 活性 蛋白 表达 干燥 方法 大规模 突变体 筛选 | ||
1.一种免纯化的活性蛋白表达干燥方法，其特征在于其步骤包括：
（1）构建重组蛋白的表达载体；
（2）将重组蛋白的表达载体转染到表达菌株中并培养，诱导表达重组蛋白；
（3）收集表达菌体，使用干燥剂去除菌体中水分，得到免纯化的活性蛋白。
2.根据权利要求1所述的免纯化的活性蛋白表达干燥方法，其特征在于：步骤（3）中干燥剂为无水硫酸钙或者无水氯化钙，干燥的操作在室温下进行。
3.根据权利要求1所述的免纯化的活性蛋白表达干燥方法，其特征为：步骤（3）中干燥时间为6-8 h。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的免纯化的活性蛋白表达干燥方法，其特征为：步骤（1）中的表达载体为原核表达质粒载体，步骤（2）中的表达载体为原核表达载体。
5.根据权利要求1-3中任一项所述的免纯化的活性蛋白表达干燥方法，其特征为：步骤（3）中采用离心或过滤的方法收集菌体。
6.一种大规模蛋白突变体库筛选方法，其特征为：构建具有多种突变类型的靶蛋白表达载体库，按照权利要求1-5中任一项所述的方法获得免纯化的活性蛋白，检测免纯化的活性蛋白的酶活。
7.根据权利要求6所述的大规模蛋白突变体库筛选方法，其特征为：采用定向DNA突变技术构建具有多种突变类型的靶蛋白表达载体库。
8.根据权利要求6所述的大规模蛋白突变体库筛选方法，其特征为：采用不定向DNA突变技术构建具有多种突变类型的靶蛋白表达载体库。
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