[发明专利]一种融合蛋白、融合蛋白疫苗及其制备方法、应用

说明书

本发明公开了一种融合蛋白、融合蛋白疫苗及其制备方法、应用，将TbpB蛋白的氨基酸残基序列中的至少一部分抗原表位区序列替换为TbpA蛋白的氨基酸残基序列的至少一部分抗原表位区序列，所得的序列为所述融合蛋白的氨基酸残基序列。本发明为了使TbpA的抗原性得到稳定形式的表达，利用TbpA和TbpB所共有的β‑桶结构特征，设计了以TbpB为支架，将TbpA的若干个表面区域的抗原决定簇替换TbpB的若干个较大的可变环区抗原决定簇，得到了TbpA+B融合蛋白，这种融合蛋白同时具有两种蛋白的抗原性，并且可以通过原核细胞表达系统得到大量的可溶形式的表达，适合于疫苗的商业化生产。

技术领域

本发明涉及转铁蛋白受体蛋白领域，具体涉及一种融合蛋白及其制备方法、疫苗、应用。

背景技术

转铁蛋白受体蛋白是猪体内病原菌—副猪嗜血杆菌的重要疫苗靶点，转铁蛋白受体蛋白包括转铁蛋白受体蛋白A(transferrin binding protein A，TbpA)和转铁蛋白受体蛋白B(transferrin binding protein B，TbpB)，TbpB蛋白是一种表面膜蛋白，它可以通过原核细胞表达系统得到大量的表达，易于生产，适合于疫苗的商业化生产；而TbpA蛋白是一种完整的外膜蛋白，通过原核细胞表达系统不容易得到大量的可溶形式的表达，因此生产成本较高，不适合用于疫苗的商业化生产。

目前单独采用TbpA蛋白制备的疫苗和单独采用TbpB蛋白制备的疫苗，在预防副猪嗜血杆菌病的保护效果并不理想，低于两者同时使用的效果，但TbpA蛋白本身不易生产，成本较高，因此急需一种能起到与两者同时使用效果相近且易于生产、成本较低的疫苗。

发明内容

为此，本发明提供一种融合蛋白、融合蛋白疫苗及其制备方法、应用，为了使TbpA的抗原性得到稳定形式的表达，利用TbpA和TbpB所共有的β-桶结构特征，设计了以TbpB为支架，将TbpA的若干个表面区域的抗原决定簇替换TbpB的若干个较大的可变环区抗原决定簇，得到了TbpA+B融合蛋白，这种融合蛋白同时具有两种蛋白的抗原性，并且可以通过原核细胞表达系统得到大量的可溶形式的表达，适合于疫苗的商业化产。

为了实现上述目的，本发明一方面提供了一种融合蛋白，将TbpB蛋白的氨基酸残基序列中的至少一部分抗原表位区序列替换为TbpA蛋白的氨基酸残基序列的至少一部分子序列，所得的序列为所述融合蛋白的氨基酸残基序列；

所述子序列的长度不少于对应待替换的抗原表位区序列的长度；

所述TbpA蛋白的编码氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；

所述TbpB蛋白的编码氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

所述抗原表位区的亲水性可以通过DNAStar Protean软件进行亲水性分析，并且可以应用在线网站ABCpred

(网址：https://webs.iiitd.edu.in/raghava/abcpred/index.html)进行抗原表位预测。通过亲水性分析来预测特定蛋白的抗原表位区为的本领域技术人员的常用技术手段。

所述TbpA蛋白的抗原表位区包括可变环区及一部分α螺旋区。

优选的，所述子序列包括TbpA蛋白的氨基酸残基序列的至少一个可变环区序列。

优选的，所述子序列包括TbpA蛋白的氨基酸残基序列的至少一个α螺旋区序列。

进一步地，所述TbpB蛋白的氨基酸残基序列中被替换的第一抗原表位区位置为第402位至第409位氨基酸残基，所述第一抗原表位区位置在替换前对应的氨基酸残基序列为SEQ ID NO:3，在替换后对应的氨基酸残基序列至少包括SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQID NO:6、SEQ ID NO:7中的一种。