[发明专利]外周血免疫细胞总RNA的m6

说明书

本发明公开了外周血免疫细胞总RNA的m⁶A修饰水平的检测试剂在制备结直肠癌诊断产品中的应用。本发明发现外周血免疫细胞RNA的m6A修饰水平对诊断结直肠癌具有良好的临床价值，其克服了现在结直肠癌诊断标志物诊断价值不高、特异性差、灵敏度不够的缺点；外其对结直肠癌的诊断价值远远优于传统血清标志物CEA、CA125、和CA19‑9，水平具有特异性好、灵敏度高特点，对结直肠癌具有较好的诊断价值。

技术领域

本发明涉及结直肠癌的诊断技术领域，具体地，涉及外周血免疫细胞总RNA的m6A修饰水平的检测试剂在制备结直肠癌诊断产品中的应用。

背景技术

结直肠癌(CRC)是一种常见的恶性肿瘤，是全球第四大癌症。在结直肠癌未发生转移前，结直肠癌患者的5年生存率高达70％-90％。然而，一旦有肿瘤转移的结直肠癌患者，其预后较差，5年生存率仅为约20％。由于人们饮食和生活习惯的改变以及缺乏有效早期血清诊断标志物，越来越多的结直肠癌患者在发现时已是晚期，结直肠癌肿瘤已发生转移。

因此，早期准确的诊断结直肠癌有效地改善结直肠癌患者的预后。目前，肠镜检查和组织活检是结直肠癌癌筛查最有效的方法。但是，肠镜检查是一种侵入性操作，对受试者来说可能是创伤性的，而且由于结直肠癌患者依从性差，整个操作有时很难完成。此外，考虑到这些肠镜的侵入性和成本，作为一种常规体检项目进行全面筛查是不切实际的。因此，迫切需要更多无创、有效的生物标志物用于结直肠癌的临床诊断。由于血液标志物检测的无痛操作和无创伤性，寻找有效的血液标志物诊断结直肠癌多年来一直是一个令人关注的问题。目前，癌抗原19-9(CA19-9)、癌抗原125(CA125)和癌胚抗原(CEA)等血液标志物广泛应用于结直肠癌的筛查和辅助诊断。然而，这三种血清标志物由于较差的特异性和敏感性，容易导致结直肠癌的误诊和漏诊。因此，迫切需要寻找更有效的血液标志物来提高结直肠癌诊断的准确性。

N6-腺苷酸甲基化(m⁶A)修饰，主要由甲基化转移酶(Writers)、去甲基化酶(Erasers) 和甲基化阅读蛋白(Readers)等共同参与调控。RNA的m⁶A修饰主要富集在3’-UTR) 和终止密码子附近，影响RNA的转录、加工和翻译。近年来，已有报道结直肠癌患者肿瘤存在异常m⁶A修饰，通过修饰IGF2的mRNA结合蛋白2(IGF2BP2)机制维持结直肠癌细胞中SOX2的表达，从而促进肿瘤进展。但是，结直肠癌患者外周血免疫细胞中的 RNA的m⁶A修饰水平及作用尚未清楚。此外，外周血免疫细胞的RNA的m⁶A修饰状态可作为糖尿病和胃癌的潜在标志物。然而，外周血免疫细胞RNA的m⁶A修饰是否可以作为结直肠癌新的诊断标志物尚不清楚。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术结直肠癌患者血液检测标志物的特异性和敏感性不好的缺陷和不足，提供外周血免疫细胞总RNA的m6A修饰水平的检测试剂在制备结直肠癌诊断产品中的应用。

为了实现上述目的，本发明是通过以下方案予以实现的：

发明人检测了105例结直肠癌患者和64例健康人外周血免疫细胞RNA的m⁶A修饰水平，发现其具有作为结直肠癌诊断标志物的临床价值。

具体地，本发明首先鉴定发现了结直肠癌患者的外周血免疫细胞RNA的m⁶A修饰水平中升高，且与临床分期相关，越是结直肠癌患者晚期的患者外周血免疫细胞RNA的m⁶A 修饰水平越高。此外，发生远处转移的结直肠癌患者外周血免疫细胞RNA的m⁶A修饰水平明显高于没有远处转移的结直肠癌患者；手术切除前的结直肠癌患者外周血免疫细胞 RNA的m6A修饰水平也高于手术切除后的结直肠癌患者。ROC曲线分析外周血免疫细胞 RNA的m6A修饰水平可作为结直肠癌诊断标志物，且其诊断价值优于传统的血清标志物 CEA、CA125、CA19-9。

因此，本发明要求保护以下内容：