[发明专利]一类生物碱化合物的制备方法

说明书

本发明公开了中国水仙鳞茎中一类新生物碱化合物的制备方法。本发明方法制备得到的两个具有免疫抑制活性的生物碱类化合物，可用于该类化合物的提取纯化，所得化合物亦可用于进一步的免疫抑制研究，也可以作为中间体，继续反应得到更多更好的相关活性化合物。

技术领域

本发明涉及一类具有免疫抑制活性新化合物的制备方法，属多花水仙碱型生物碱化合物。

背景技术

中国水仙(Narcissus tazetta var.chinensis)是石蒜科(Amaryllidaceae)水仙属(Narcissus)多年生草本植物，其鳞茎具有清热解毒、散结消肿功效。研究表明中国水仙鳞茎中主要含有生物碱、黄酮、黄烷及其衍生物和木脂素等成分，其中石蒜生物碱是其特有的次生代谢产物，结构类型丰富，根据环的类型不同分为石蒜碱类、网球花胺类、多花水仙碱类、水仙环素类和加兰他敏类等。

为了提高中国水仙药用植物资源的综合利用效率，发明人对其鳞茎部分的生物碱成分进行了系统研究，以期能够发现具有生物活性的提取物或化合物。

发明内容

发明人通过对中国水仙鳞茎部分生物碱进行提取纯化，最终获得了一类具有良好生物免疫抑制活性的生物碱类化合物。

具体地，本发明提供了如式I所述的化合物的制备方法，其特征在于：

其中，R选自H或甲基；

包括如下内容：

(1)水仙鳞茎，乙醇或甲醇提取，提取液除去溶剂后，在碱性水溶液中与正丁醇萃取，取正丁醇部位硅胶柱层析，氯仿-甲醇＝1:0-0:1梯度洗脱，薄层跟踪合并相似组分，依次得到A-G七个部分；

(2)取B部分上硅胶柱层析，以石油醚-丙酮＝15:1-1:1梯度洗脱，薄层跟踪合并相似组分，得到B-1～B-6六个部分；

(3)取B-5部分进行ODS反相柱层析，以甲醇-水＝0:1-1:1梯度洗脱，薄层跟踪合并相似组分，得到B-5-1～B-5-5五个部分；

(4)取B-5-2部分上半制备HPLC，以20％甲醇水洗脱，得到R为甲基的式I化合物；

(5)取G部分进行ODS反相柱层析，以甲醇-水＝0:1-1:0梯度洗脱，薄层跟踪合并相似组分，得到G-1～G-4四个部分；取G-1部分上氨基硅胶柱层析，以氯仿-甲醇＝40:1-20:1梯度洗脱，得到R为H的式I化合物。

其中，内容(1)中，碱性水溶液pH为9～11；氯仿-甲醇梯度洗脱时，每个梯度洗脱2-4个柱体积，例如2、3、4个柱体积。

其中，pH可以选自9、10、11或者其他碱性条件。

内容(2)中，石油醚-丙酮梯度洗脱时，每个梯度洗脱2-4个柱体积，例如2、3、4个柱体积。

内容(3)中，甲醇-水梯度洗脱时，每个梯度洗脱3-5个柱体积，例如3、4、5个柱体积。

内容(4)中，20％甲醇水中含有1-3‰三氟乙酸，例如1、2、3‰。

内容(4)中，采用1mL/min，收集保留时间约8min的部位，即得R为甲基的式I化合物。当然若采用其他流速，保留时间会有所变化，但仍可根据常规方法获知保留时间。

内容(5)中，甲醇-水梯度洗脱时，每个梯度洗脱3-5个柱体积，例如3、4、5个柱体积。

内容(5)中，氯仿-甲醇梯度洗脱时，每个梯度洗脱2-3个柱体积，例如2、3个柱体积。

内容(5)中，收集氯仿-甲醇＝30:1梯度段，即得R为H的式I化合物。