[发明专利]一种miRNA13896过表达的工程化人脐带间质干细胞源外泌体及制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种miRNA13896过表达的工程化人脐带间质干细胞源外泌体及制备方法和应用，涉及生物医药技术领域。本发明采用30％蔗糖密度梯度离心法分离获取人脐带间质干细胞上清中的外泌体hucMSC‑Ex，能够在‑80℃超低温冰箱中长期保存并保持生物活性；本发明利用所述hucMSC‑Ex为纳米药物递送载体，负载miRNA13896形成miRNA13896过表达的工程化人脐带间质干细胞源外泌体，能够被肿瘤细胞高效摄取，并主动靶向到肿瘤部位，并在体内外抑制胃癌细胞的增殖、迁移和自我更新，可以结合其他促抗癌药物或材料增强其抗肿瘤抑制效果，因此可将其用于制备预防和/或治疗胃癌的药物。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种miRNA13896过表达的工程化人脐带间质干细胞源外泌体及制备方法和应用。

背景技术

胃癌是全球常见的消化道恶性肿瘤之一。目前治疗胃癌的方法主要有手术治疗、放射治疗和化学治疗，除此之外还有热疗和生物治疗等。传统的治疗方法虽然有一定效果但仍面临着疗效不佳，易复发和转移等问题亟需解决。因此，急需寻找一个新的替代策略用于胃癌的干预治疗。

间质干细胞是一类能够自我更新和多向分化的成体干细胞。研究显示，间质干细胞在多肿瘤的干预中具有双刃剑的作用，其中脂肪和骨髓来源的间质干细胞争议最大，具有促瘤和抑瘤双重作用，因此目前还不能确认，是否能够将不同来源的间质干细胞用于肿瘤的干预和治疗。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种miRNA13896过表达的工程化人脐带间质干细胞源外泌体及制备方法和应用，不仅能特异性归巢到肿瘤部位，靶向胃癌细胞，还能抑制胃癌细胞的生长、迁移和自我更新，进而抑制肿瘤生长。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种脐带间质干细胞外泌体的分离和纯化方法，包括以下步骤：(1)对脐带间质干细胞进行分离培养至P3代，待P3代hucMSC的融合度达50％～60％时洗涤，将洗涤后的P3代hucMSC置于去血清外泌体的α-MEM培养基培养至P6代，取hucMSC上清；所述α-MEM培养基中还有质量含量为10％的胎牛血清；

(2)对所述hucMSC上清进行离心和除菌，得脐带间质干细胞外泌体hucMSC-Ex；

所述离心包括对所述hucMSC上清进行第一离心、第一离心的上清液进行第二离心、第二离心的上清液进行第一超滤离心，第一超滤离心的膜上液进行第三离心，利用PBS缓冲液稀释第三离心的沉淀后进行第二超滤离心，收集第二超滤离心的膜上液；

所述第一离心的离心力为2000g，离心时间为10min；

所述第二离心的离心力为10000g，离心时间为30min；

所述第一超滤离心为100kDa MWCO超滤离心，离心力为1000g，离心时间为30min；

所述第三离心为将第一超滤离心的膜上液置于质量百分含量为30％蔗糖/重水密度垫上进行，所述第三离心的离心力为100000g，离心时间为3h；

第二超滤离心为100kDa MWCO超滤离心，离心力为1000g，离心时间为30min。

优选的，步骤(2)所述离心的温度均为4℃。

优选的，步骤(2)收集第二超滤离心的膜上液后过0.22μm滤膜，滤液为所述hucMSC-Ex。

本发明还提供了利用上述分离和纯化方法得到的脐带间质干细胞外泌体hucMSC-Ex。