[发明专利]基于HPLC-UV法同时测定赤松茸中黄嘌呤、鸟嘌呤、腺嘌呤和次黄嘌呤含量的方法

权利要求书

1.一种基于HPLC-UV法同时测定赤松茸中黄嘌呤、鸟嘌呤、腺嘌呤和次黄嘌呤含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）对照品标准溶液的配制：以甲醇为溶剂，分别配制获得一系列不同浓度的黄嘌呤、鸟嘌呤、腺嘌呤和次黄嘌呤对照品标准溶液；

2）供试品溶液的配制：

取0.2g经烘干、粉碎、过筛的赤松茸或其衍生物样品，加入8-12ml、60-70%的强氧化性酸，90-110℃水浴加热回流水解20-40min，置于冰水浴中冷却，再用碱液调至中性，过滤，滤液调pH至3.8-4.2，离心，取上清液，用纯化水定容至50ml棕色容量瓶中，即得供试品溶液；

3）相对校正因子和相对保留时间的计算：

精密吸取步骤1）制备所得不同浓度的黄嘌呤、鸟嘌呤、腺嘌呤和次黄嘌呤对照品溶液进行液相色谱测定，获得HPLC-UV色谱图，测量并记录各嘌呤色谱峰的峰面积，以腺嘌呤作为标准品，分别计算黄嘌呤、鸟嘌呤、和次黄嘌呤对腺嘌呤的相对校正因子（f_s/x）和相对保留时间（t_Rx）；

所述相对校正因子（f_s/x）计算公式为：

式中：f_s/x 为待测嘌呤x的相对校正因子，A_s为腺嘌呤色谱峰峰面积，C_s为腺嘌呤质量浓度，A_x为待测嘌呤x的色谱峰峰面积，C_x为待测嘌呤x的质量浓度；

所述相对保留时间（t_Rx）计算公式为：

式中：t_Rx表示待测嘌呤x的相对保留时间；t_x表示待测嘌呤x色谱峰的保留时间；t_s表示腺嘌呤色谱峰的保留时间；

4）供试品中嘌呤的检测：

取步骤1）制备得到的一系列不同浓度的腺嘌呤对照品标准溶液进行液相色谱测定，获得HPLC-UV色谱图，测量并记录腺嘌呤色谱峰的峰面积，采用外标法以腺嘌呤的峰面积为纵坐标，以腺嘌呤的浓度为横坐标，绘制标准曲线并计算获得腺嘌呤的线性方程；

取步骤2）制备得到的供试品溶液进行液相色谱测定，获得HPLC-UV色谱图，测量并记录腺嘌呤、鸟嘌呤、黄嘌呤及次黄嘌呤色谱峰的峰面积，将腺嘌呤的峰面积代入腺嘌呤的线性方程，计算获得供试品中的腺嘌呤含量；

其中，鸟嘌呤、黄嘌呤及次黄嘌呤的含量按下述公式进行计算：

；式中：

表示待测嘌呤x在赤松茸或其衍生物样品中的质量浓度；

表示待测嘌呤x在供试品溶液中的质量浓度；

表示供试品溶液中赤松茸或其衍生物样品的质量浓度；

表示供试品溶液中待测嘌呤x的色谱峰峰面积。