[发明专利]苏丹黑B2染料及染色液、使用其的检测方法、含有其的凝胶电泳体系、试剂盒及制备方法

说明书

本发明公开一种苏丹黑B2染料及染色液、使用其的检测方法、含有其的凝胶电泳体系、试剂盒及制备方法，该苏丹黑B2染料由苏丹黑B的结构改造获得。通过本发明的技术方案，在测定脂蛋白亚分型的试剂盒及凝胶电泳体系中，能大大提高染料的脂溶性，使得染料和脂蛋白的结合条件更简单，结合时间更短，染色效果及染色效率更高；能准确区分各脂蛋白组份，同时定性检测脂蛋白亚分型，包括高密度脂蛋白、低密度脂蛋白及极低密度脂蛋白。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体为一种苏丹黑B2染料及染色液、使用其的检测方法、含有其的凝胶电泳体系、试剂盒、制备方法及应用。

背景技术

目前，对于脂代谢的检测，大部分试剂盒采用单项进行检测，或者采用血脂四项同时进行检测，但其中低密度脂蛋白的含量主要通过公式进行计算，常常会导致低密度脂蛋白定量检测结果的不准确；对于亚型的检测，主要用核磁共振，非变性梯度凝胶电泳、密度梯度离心等方法，这些方法费时费力，试验过程不好控制，需要大型仪器极高技能的专业人士进行操作。

此外，有部分使用凝胶电泳方法检测脂蛋白亚分型，但由于常规使用的苏丹黑B为重氮染料，能使中性脂肪呈蓝黑色，显示磷脂效果最好；而脂蛋白中各个亚型高密度、低密度等的主要成分有差异，所以苏丹黑B与脂蛋白的各个亚型的结合不均一，导致染色结果的差异很大，造成不能很好的同时定性检测脂蛋白各个亚分型，包括高密度脂蛋白、低密度脂蛋白及极低密度脂蛋白。同时，由于苏丹黑B需要在37℃下进行染色，不易操作，容易导致实验结果不准确。针对上述问题，目前还没有很好的解决方案。

发明内容

本发明的目的在于提供一种苏丹黑B2染料及染色液、使用其的检测方法、含有其的凝胶电泳体系、试剂盒、制备方法及应用，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

根据本发明的一个方面， 提供一种苏丹黑B2染料，所述苏丹黑B2由苏丹黑B的结构改造获得，其具有如下所示的结构：

。

根据本发明的一个方面，提供一种苏丹黑B2染色液，包含上述的苏丹黑B2染料。

根据本发明的一个方面，提供上述染色液的制备方法，包括下列步骤：

取浓度为质量体积比0.1-1.5%的上述的苏丹黑B2染料，将所述苏丹黑B2加入到选自丙酮、丙二醇、异丙醇和乙二醇组合中的一种中，以加入的丙酮或丙二醇或异丙醇或乙二醇的总体积计，其中含有的丙酮或丙二醇或异丙醇或乙二醇的体积百分比范围为大于等于98.0%并小于等于99.3％；在其中加入体积比为0.5-1.5%的N,N-二甲基甲酰胺（N,N-Dimethylformamide, DMF）或1-甲基-2吡咯烷酮；

再在其中加入辛基酚类聚氧乙烯醚表面活性剂（Triton X-405）、聚乙二醇辛基苯基醚、吐温三者中的一种作为表面活性剂，所述表面活性剂的使用体积比为0.05-0.5%（V/V）；

将上述混合溶液充分混合后，避光保存，即获得所述染色液。

根据本发明的一个方面，提供一种脂蛋白亚分型定量检测方法，所述脂蛋白亚分型包括极低密度脂蛋白（very low density lipoprotein, VLDL）、低密度脂蛋白（lowdensity lipoprotein, LDL）及其1-7亚分型、高密度脂蛋白（high density lipoprotein,HDL），所述检测方法按照下列步骤进行：

S01：采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对血清或血浆中的脂蛋白进行分离；

S02：将所述血清或血浆中的脂蛋白用上述染料或上述的染色液或上述制备方法制得的染色液染色后，取混合液30μL加入到凝胶柱上；