[发明专利]一种手参成熟种子的预处理方法、萌发方法和幼苗培育方法

说明书

本发明提供了一种手参成熟种子的预处理方法和萌发方法，属于植物育苗技术领域。本发明通过2％的次氯酸钠浸泡，使手参成熟种子种皮变薄，种胚易于突破；而后将经过预处理的成熟手参种子置于种子萌发悬浮培养基中，通过调整琼脂的含量，配制成悬浮琼脂浆，克服了手参种子质轻易漂浮，不易接触营养液的问题；通过添加适量的赤霉素，拮抗手参成熟种子的萌发抑制物质。本发明利用上述预处理方法和种子萌发方法，解决了手参成熟种子难以萌发的问题，且萌发后的种子可以进行分化培养、壮苗生根，该方法成本低廉，培养条件简单，通过组织培养技术，扩大了手参的繁殖系数，可作为一种提高手参种子萌发率的快速繁殖方法。

技术领域

本发明属于植物育苗技术领域，具体涉及一种手参成熟种子的预处理方法、萌发方法和幼苗培育方法。

背景技术

手参(Gymnadenia conopsea(L.)R.Br.)为兰科手参属地生草本植物，以肉质块茎入药，含有苷类、糖类、二氢芪类和菲类、甾醇类等成分，具有补肾益精、理气止痛、止咳平喘的功效，现代研究表明，手参具有抗过敏、抗氧化、促进祖细胞增殖、抑制乙型肝炎病毒表面抗原的作用，是我国的传统名贵中药，也是蒙药和藏药的常用药，具有极高的药用价值。

手参植物每年6月～7月从茎顶部抽生出穗状花序，8月～9月长圆形蒴果成熟，种子细小，无胚乳，种皮厚且致密，种胚难以突破，自然条件下需要与真菌共生才能萌发，萌发率低。手参的无性繁殖系数低于2，由老手参根部增生一个小手参，小手参长大后，老手参死亡。因此，解决手参种苗工厂化生产是解决手参资源利用和开发的关键。前人曾尝试利用手参花梗、茎尖、根尖、侧芽等外植体组织培养快繁技术将其扩繁，但诱导培养难度大，不易成功，利用手参种子进行非共生培养，常规无菌接种操作，仅未成熟的不易剥离胎座的白色种子萌发，且萌发率仅达到20％，中度成熟的黄色种子和重度成熟的褐色种子均不能萌发。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种手参成熟种子的预处理方法、萌发方法和幼苗培育方法，促使手参成熟的褐色种子萌发，且萌发后的种子可以进行分化培养、壮苗生根，该方法成本低廉，培养条件简单。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种手参成熟种子的预处理方法，包括以下步骤：清洗手参成熟蒴果表面，在无菌环境下对清洗干净的手参成熟蒴果进行消毒，剥离种子后置于次氯酸钠水溶液中浸泡1～2min，无菌水冲洗，得预处理种子；

所述次氯酸钠水溶液中次氯酸钠的质量百分含量为1.0～2.0％。

优选的，所述清洗包括利用体积百分含量为65％～75％的乙醇水溶液擦拭手参成熟蒴果表面。

优选的，所述消毒包括依次利用体积百分含量为75％的乙醇水溶液消毒20～30s和利用质量百分含量为0.1％的升汞溶液消毒4～6min。

优选的，在所述乙醇水溶液消毒和升汞溶液消毒后，分别包括利用无菌水冲洗3～5次。

本发明还提供了一种手参成熟种子的萌发方法，包括以下步骤：取出利用上述预处理方法得到的预处理种子，置于种子萌发悬浮培养基中，进行30～40d的暗培养后进行光照培养；

所述种子萌发悬浮培养基以N6培养基为基本培养基，还包括GA₃0.5～1.5g/L、蔗糖20～30g/L，和琼脂3～4g/L，pH值为5.6～5.8。

优选的，所述暗培养的温度为24±1℃，湿度为80±5％。

优选的，所述光照培养的温度为24±1℃，湿度为80±5％，光照时间为14～16h/d，光照强度为2000～2500Lx。