[发明专利]一种多肽-Fc融合蛋白及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种多肽-Fc融合蛋白，其特征在于，所述多肽-Fc融合蛋白包括：多肽和Fc片段；

所述多肽为特异性靶向肿瘤细胞的多肽，且所述多肽含有5-30个氨基酸；

所述多肽与Fc片段通过柔性肽段连接。

2.根据权利要求1所述的多肽-Fc融合蛋白，其特征在于，优选地，所述Fc片段包括IgG1的Fc段；

优选地，所述Fc片段的氨基酸序列包括SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；

优选地，所述柔性肽段包括GGSSGGS或(GGGGS)n，其中n为1-3的整数；

优选地，所述Fc片段的C端连接His标签；

优选地，所述多肽的N端连接信号肽；

优选地，所述信号肽的氨基酸序列包括SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列；

优选地，所述信号肽的N端连接Kozak序列；

优选地，所述Kozak序列的核苷酸序列包括SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列；

优选地，所述多肽-Fc融合蛋白包括依次连接的Kozak序列、信号肽、多肽、柔性肽段、Fc片段和His标签。

3.根据权利要求1或2所述的多肽-Fc融合蛋白，其特征在于，所述多肽含有5-20个氨基酸；

优选地，所述多肽包括A1多肽，所述A1多肽的氨基酸序列包括SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列。

4.一种核酸片段，其特征在于，所述核酸片段包含编码如权利要求1-3中任一项所述的多肽-Fc融合蛋白的核苷酸序列。

5.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体含有至少一个拷贝的如权利要求4所述的核酸片段。

6.一种重组的宿主细胞，其特征在于，所述重组的宿主细胞含有如权利要求4所述的核酸片段或如权利要求5所述的表达载体。

7.一种如权利要求1-3中任一项所述的多肽-Fc融合蛋白的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：

构建表达所述多肽-Fc融合蛋白的表达载体，而后，表达并纯化得到所述多肽-Fc融合蛋白。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

(1)以重叠延伸PCR的方法构建表达如权利要求1-3中任一项所述的多肽-Fc融合蛋白的表达载体；

(2)将所述表达载体转化到用于克隆的宿主细胞中，筛选阳性转化菌；

(3)从所述阳性转化菌中提取所述表达载体，并转化到用于表达的宿主细胞中，对所述用于表达的宿主细胞扩大培养，诱导表达所述多肽-Fc融合蛋白，而后进行纯化，得到所述多肽-Fc融合蛋白。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述表达载体包括质粒pcDNA3.4或pcDNA3.1；

优选地，步骤(2)所述用于克隆的宿主细胞包括大肠杆菌DH5α、TOP10或Stbl3中的任意一种；

优选地，步骤(3)所述用于表达的宿主细胞包括原核细胞或真核细胞；

优选地，所述真核细胞包括Expi-CHO细胞或293T细胞；

优选地，步骤(3)所述纯化的方法包括Protein A磁珠纯化或亲和凝胶层析；

优选地，步骤(1)中所述重叠延伸PCR的引物包括正向引物1、正向引物2和反向引物；

优选地，所述正向引物1包括SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列；

优选地，所述正向引物2包括SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列；

优选地，所述反向引物包括SEQ ID NO.7所示的核苷酸序列。

10.一种如权利要求1-3中任一项所述的多肽-Fc融合蛋白在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述抗肿瘤药物为激活NK细胞、诱导NK细胞发挥细胞毒性作用的药物。