[发明专利]提升牛心包瓣膜材料抗钙化性能的试剂组合和方法

权利要求书

1.提升牛心包瓣膜材料抗钙化性能的试剂组合，其特征在于，包括新霉素、戊二醛、谷胱甘肽、柚皮素和MgCl₂；

所述新霉素的浓度为0.5～2mmol/L；所述戊二醛的使用质量浓度为0.625％；所述谷胱甘肽的浓度为2～4mmol/L；所述柚皮素的使用质量浓度为0.1％～1％；所述MgCl₂的使用质量浓度为0.1％～1％；所述的试剂组合中，各五分的质量比为：新霉素：戊二醛：谷胱甘肽：柚皮素：MgCl₂＝(500～2000):6250：(600-1200):(1000～10000):(1000～10000)；

以g/mL计，所述牛心包瓣膜材料与所述试剂组合的重量体积比为(0.5～1)：(4～10)。

2.如权利要求1所述的试剂组合在提升牛心包瓣膜材料抗钙化性能中的应用。

3.提升牛心包瓣膜材料抗钙化性能的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1：获得牛心包瓣膜材料；

步骤2：脱细胞；

步骤3：采用如权利要求1所述的试剂组合交联；

步骤3具体包括：NE交联、戊二醛交联、谷胱甘肽解毒、柚皮素交联和MgCl₂处理的步骤；

所述NE交联具体为：用pH5.5，50mmol/L，MES(2-(N-吗啡啉)乙磺酸)缓冲液，配置0.5～2mmol/L新霉素，在摇床上120rpm震荡1h；

所述戊二醛交联具体为：0.625％戊二醛，交联4℃48h或20℃24h，每24h换液；

所述谷胱甘肽解毒具体为：2～4mmol/L谷胱甘肽,PBS溶液，37℃，120rpm震荡24h；

所述柚皮素交联具体为：0.1％～1％柚皮素，PBS溶液，37℃，24～48h，每24h换液；

所述MgCl₂处理具体为：0.1％～1％的MgCl₂，PBS溶液，37℃，6～24h；

步骤2中所述脱细胞包括如下步骤：

步骤①：0.1％新洁尔灭37℃处理30min，每10min搅拌一次；

步骤②：0.25％Triton X-100在37℃，120rpm震荡漂洗48h，每12h换液；

步骤③：3u/ml DNase-I/0.03mg/ml RNase-A 37℃120rpm震荡漂24h，每12h换液；

步骤④：蒸馏水漂洗48h，每8h换液；

步骤⑤：PBS漂洗24h，换液后保存；

步骤1具体为：获得牛心包，热缺血时间30分钟内，分离脂肪和外膜，用含抗生素无菌PBS液，即青霉素和链霉素，浓度均为100U/ml，清洗多次，浸入0.1％新洁尔灭30min，含抗生素无菌PBS冲洗心包内侧和外侧10min×3次，4℃保存。

4.如权利要求3所述的方法制得的牛心包瓣膜材料。