[发明专利]一种模拟胶质瘤放疗后再增殖的体外细胞模型及其构建方法和应用

说明书

本发明属于医药生物技术领域，公开了一种模拟胶质瘤放疗后再增殖的体外细胞模型。该细胞模型由标记胶质瘤细胞与放疗照射后的胶质瘤细胞共培养而成，所述标记胶质瘤细胞为荧光素酶和绿色荧光蛋白共同标记的人胶质瘤细胞。该细胞模型制备方法为将放疗照射后的胶质瘤细胞接种至培养基中，37℃培养12‑48h，再向培养基中接种荧光素酶和绿色荧光蛋白共同标记的胶质瘤细胞，进行共培养。该细胞模型可用于模拟放疗后胶质瘤再增殖的过程；此外，在此模型中加入某些化合物或者药物，探究这些物质对于胶质瘤放疗后再增殖是否存在抑制作用。因此，此模型可用于筛选抑制胶质瘤放疗后再增殖的潜在药物。

技术领域

本发明属于医药生物技术领域，具体涉及一种模拟胶质瘤放疗后再增殖的体外细胞模型及其构建方法和应用。

背景技术

胶质瘤是指起源于中枢神经系统胶质细胞的恶性肿瘤，占原发性颅内恶性肿瘤的80%左右。基于组织学类型，胶质瘤包含星形细胞瘤、少突胶质细胞瘤、室管膜细胞瘤、混合细胞类型以及其它类型。世界卫生组织（WHO）中枢神经系统肿瘤分类系统把胶质瘤分为I-IV级，I、II级为低级别胶质瘤，III、IV级为高级别胶质瘤。不同类型和级别的胶质瘤有着不同的生物学特征、临床特点以及预后情况。

胶质母细胞瘤是最常见的原发性脑恶性肿瘤，约占50%。胶质母细胞瘤是恶性程度最高的胶质瘤，WHO分级为IV级。目前针对胶质母细胞瘤的基本治疗策略为最大限度的手术切除、术后同步放化疗以及序贯化疗。尽管针对胶质母细胞瘤已经形成了以手术、放疗、化疗为基础的综合治疗模式，然而其临床预后仍然极其不理想，一年生存率不到40%，五年生存率约为5%。胶质母细胞瘤在经过初始一线治疗后几乎无法避免复发，这是其不良预后的重要原因。

胶质瘤放疗后再增殖是指在放疗中幸存的胶质瘤细胞于放疗间歇期或者放疗结束后以更快的速度加速增殖，最终导致肿瘤复燃的生物学过程。探索胶质瘤放疗后再增殖的机制有利于揭示胶质瘤放疗后复发的重要分子机制，还可为研发能够抑制胶质瘤放疗后再增殖的相关药物提供更多有效靶点。

建立模拟性强、条件可控、重复性好、便于操作的模拟胶质瘤放疗后再增殖体外细胞模型不仅可为探索其机制提供研究工具，还可为筛选能够抑制胶质瘤放疗后再增殖药物提供筛选模型。然而经过充分的文献检索和挖掘，目前国内外尚缺乏合适的细胞模型。

发明内容

针对现有技术中存在的问题和不足，本发明的目的之一旨在提供一种模拟胶质瘤放疗后再增殖的体外细胞模型，本发明的目的之二旨在提供一种模拟胶质瘤放疗后再增殖的体外细胞模型的构建方法，本发明的目的之三在于提供一种模拟胶质瘤放疗后再增殖的体外细胞模型的应用。

为实现发明目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明第一方面提供了一种模拟胶质瘤放疗后再增殖的体外细胞模型，所述体外细胞模型由标记胶质瘤细胞与放疗照射后的胶质瘤细胞共培养而成，所述标记胶质瘤细胞为荧光素酶和绿色荧光蛋白共同标记的人胶质瘤细胞。

根据上述的模拟胶质瘤放疗后再增殖的体外细胞模型，优选地，所述胶质瘤细胞为人胶质瘤细胞系U87-MG（简写U87）。

根据上述的模拟胶质瘤放疗后再增殖的体外细胞模型，优选地，所述放疗照射为X射线照射，所述放疗照射剂量为10Gy。更加优选地，所述放疗照射为使用医用直线加速器产生的X射线照射进行照射。

根据上述的模拟胶质瘤放疗后再增殖的体外细胞模型，优选地，所述荧光素酶为萤火虫荧光素酶。

本发明第二方面提供了一种模拟胶质瘤放疗后再增殖的体外细胞模型的构建方法，该方法具体为：将放疗照射后的胶质瘤细胞接种至培养基中，37℃培养12-48h，然后再向培养基中接种标记胶质瘤细胞，进行共培养，共培养结束得到模拟胶质瘤放疗后再增殖的体外细胞模型。

根据上述的构建方法，优选地，所述放疗照射后的胶质瘤细胞的接种量与标记胶质瘤细胞接种量之比为150:1。