[发明专利]一种测定硼酸含量的方法

说明书

本发明提供的一种用HPLC‑CAD测定苯硼酸中硼酸含量的分析方法，该方法使用乙腈和水混合溶剂溶解苯硼酸得到供试品，通过HPLC‑CAD对所述样品进行检测，采用外标法对苯硼酸中的硼酸进行控制，该方法实用性强，具有高效的专属性、灵敏度，提高了对苯硼酸中硼酸残留量的有效控制。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种苯硼酸中硼酸含量的分析检测方法。

背景技术

硼酸理论上由氧化硼和水组成，性状为白色的粉末状结晶或者三斜轴面鳞片状的带光泽结晶。硼酸的水溶液呈微酸性。硼酸在水中的溶解度随温度升高逐渐增大，并随水蒸气挥发。硼酸在无机酸中的溶解度比水中小。硼酸加热至100℃时会脱水生成偏硼酸，160℃生成焦硼酸，300℃生成硼酸酐。

苯硼酸合成工艺中用到硼酸三甲酯，硼酸三甲酯水解生成硼酸。硼酸的含量直接影响苯硼酸的含量。目前，常用硼酸的检测方法有：国家标准（GB5009.275-2016）中的姜黄比色法、快速萃取-姜黄素分光光度法、电感耦合等离子体原子发射光谱法（ICP-AES）、电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS）、原子吸收分光光度法、甲亚胺-H光谱法、离子色谱法。离子色谱法以氢氧化钠作为淋洗液，测定硼酸含量，苯硼酸本身会消耗氢氧化钠量，专属性差；其他方法通过测定样品中硼元素，得到硼酸检测结果，苯硼酸本身也含有硼元素，影响测定方法的准确性。为保障苯硼酸的质量可控，研发一种测定苯硼酸中硼酸残留量的方法是十分必要的。

发明内容

由于硼酸没有共轭结构，紫外吸收弱，因此苯硼酸中硼酸含量的控制是一个难点。电喷雾检测器（CAD）作为一款质量敏感型通用检测器，其响应值只与进样质量有关，不依赖化合物的结构和性质，可检测所有非挥发或者半挥发性化合物。电喷雾检测器的检测原理在于其将分析物转化成溶质颗粒；溶质颗粒与带正电荷的氮气颗粒碰撞，电荷随之转移到溶质颗粒上，溶质颗粒越大，带点越多；溶质颗粒将所带的电荷转移给收集器，通过高灵敏度的静电检测计测出溶质颗粒的带点量，由此产生的信号电流与溶质含量成正比。同时，①硼酸分子量小，在色谱柱中基本无保留；②硼元素比较活泼，硼酸本身电信号弱；③硼酸没有共轭结构，紫外吸收弱。因此需要使用亲水性色谱柱，增加硼酸保留；通过选择适当的溶剂，增大样品浓度及进样体积，才可以满足检测要求。但是，在样品浓度和进样量增大的情况下，主峰超载，如果采用面积归一化法及主成分自身对照法，均存在较大偏差。

根据硼酸的自身特点，本发明人经过深入研究，开发出一种用HPLC-CAD测定苯硼酸中硼酸含量的分析方法，并采用外标法对苯硼酸中的硼酸进行控制。所述方法使用乙腈和水混合溶剂溶解苯硼酸得到供试品，通过HPLC-CAD对所述样品进行检测；色谱条件为：使用C18亲水色谱柱；流动相由A相和B相组成，其中以酸性溶剂作为A相，有机溶剂作为B相。

本发明所述的混合溶剂中乙腈和水体积比为1:3 – 3:1。在一些实施例中，混合溶剂中乙腈和水体积比为1:1。

本发明所述的A相为酸性溶剂，可以是选自甲酸、乙酸、三氟乙酸中的一种或几种优选甲酸。在一些实施例中，酸性溶剂为0.1%的甲酸溶液。

本发明所述的B相为有机溶剂，可以是选自甲醇或者乙腈中，优选有机溶剂为乙腈。

本发明所述的供试品浓度为50-200mg/ml，优选供试品浓度为100mg/ml。

本发明所述的十八烷基硅烷键合相作为固定相的亲水型色谱柱，例如4.6*250mm，5µm ，Aglient ZORBAX SB-Aq色谱柱。

本发明所述色谱柱的柱温为25-45℃，在一些实施例中，色谱柱的柱温为30℃。

本发明所述的电喷雾检测器（CAD），雾化温度为35℃。

本发明所述的分析方法是采用梯度洗脱程序进行的，其中梯度洗脱程序如下表1所示：

表1. 梯度洗脱条件