[发明专利]大麻SSR分子标记及其应用

说明书

本发明涉及农作物分子生物学技术领域，具体涉及大麻SSR分子标记及其应用。本发明提供12个大麻SSR分子标记，还提供一套适于毛细管电泳平台的检测所述SSR分子标记的引物组合。利用这12个SSR分子标记可以：鉴定大麻品种及分析遗传多样性；区分大麻格列西亚和汉麻7号、龙大麻5号和龙麻1号、庆大麻3号和尤纱‑31等品种。通过本发明的大麻SSR分子标记的应用，能够在基因组水平上拓展大麻可用标记位点的范围；为大麻品种、种质资源鉴定，亲缘关系评价，细胞质遗传特性等研究提供新工具，应用前景良好。

技术领域

本发明涉及农作物分子生物学技术领域，具体涉及大麻SSR分子标记及其应用。

背景技术

大麻(Cannabis sativa L.)是大麻科大麻属一年生草本植物，有重要的工业及药用价值。大麻茎皮可以沤制纤维；果实因富含油脂可用作食物油；大麻仁是上等的中药材，具有润滑、活血等作用，可治疗肠燥便秘、消渴、热淋、风痹、癣痢等病。近年，欧洲通过大麻提取物临床应用发现大麻对癌症有抑制作用。大麻素是大麻生长发育过程中产生的萜酚类化合物，其中酚类化合物是主要的研究对象，包括大麻酚(CBN,cannabinol)、大麻二酚(CBD,cannabidiol)、次大麻二酚(CBDV,Cannabidivarin)等。以大麻二酚(CBD)为代表的酚类物质具有丰富的药理学作用。

大麻种植广泛，品种繁多，且随着育种进程的加快，其品种数量也急剧增加。对大麻品种的鉴定、遗传多样性分析及DNA指纹数据库的构建，可以客观、全面了解当前大麻品种现状，对于品种管理、品种选育以及种质资源收集和保护具有重要意义。大麻各类群间种质资源来源地较为混乱，其原因可能是种质资源在国与国之间、地区与地区之间频繁交流所致，导致部分品种的来源地并不是其原产地。并且大麻是雌雄异株、异花授粉作物，在培育过程中极易接受外来花粉干扰，品种间极易杂交，所以品种内易混杂、纯度低，严重影响工业大麻种子质量和新品种培育。目前，同名异物、同物异名的现象在国内已有显现。

大麻尤纱-31是中国从乌克兰引进的高纤维含量品种；格列西亚、汉麻7号、龙大麻5号、龙麻1号和庆大麻3号是中国经过育种改良的杂交品种，其除了纤维含量高、抗病抗倒伏的优点外，还适宜在中国东北部种植。将格列西亚、汉麻7号、龙大麻5号、龙麻1号、庆大麻3号和尤纱-31在田间种植，通过调查和观测其农艺性状发现，格列西亚和汉麻7号、龙大麻5号和龙麻1号、庆大麻3号和尤纱-31分别在子叶形状、子叶色、雄开花日数、雌开花日数、雌花色、株高和茎粗上有很大的相似性(表1)，在外观上很难加以分辨。这些品种的种子如若发生混淆，不仅造成市场混乱，品种优势不得体现，还会严重影响大麻育种研究工作。因此，对这些相似品种加以区分，对大麻的市场价值和科研价值都有着现实意义。而传统的品种真实性鉴定是田间种植后，通过对农艺性状的观测和调查来实现，这种方法工作量大、繁琐，费人力物力财力。

分子标记鉴定技术在作物指纹图谱构建中显示出了独特的优越性，是品种鉴定的主要手段。其中，简单重复序列(Simple Sequence Repeats,SSR)标记技术具有数量丰富、多态性高、遗传上呈共显性、扩增稳定、引物序列易于交流等特点而受到广泛重视。简单重复序列又称微卫星(Microsatellites)，是一种由1-6个核苷酸为重复单元的串联重复序列，广泛分布于真核生物基因组的编码区和非编码区。在植物育种中，SSR已经成为一种重要的分子标记，目前，基于SSR标记的水稻、玉米、马铃薯等作物主栽品种的DNA指纹图谱数据库已构建完成，但至今鲜有大麻SSR指纹图谱构建及品种鉴定的报道。因此，开发大麻SSR分子标记具有重要意义。

表1大麻品种的主要农艺性状调查