[发明专利]鱼源蛋白酶基因及其应用

说明书

本发明公开了一种鱼源蛋白酶基因及其应用，所述鱼源蛋白酶基因的开放阅读框具有如SEQ ID No.1、SEQ ID No.3或SEQ ID No.5所示的核苷酸序列，或为与SEQ ID No.1、SEQ ID No.3或SEQ ID No.5互补配对的核苷酸序列，或为编码氨基酸序列如SEQ ID No.2、SEQ ID No.4或SEQ ID No.6的核苷酸序列。本发明的鱼源蛋白酶基因有助于促进鱼类对高蛋白人工饲料的消化吸收能力，提高鱼的生长性能，可以针对性地应用于鱼类养殖中，绿色高效，前景可观。

技术领域

本发明属于动物基因工程技术领域，更具体地，本发明涉及一种鱼源蛋白酶基因，以及包含所述鱼源蛋白酶基因的重组质粒、包含所述重组质粒的酵母重组表达载体，及其在鱼类养殖和提高鱼类消化能力中的应用。

背景技术

鱼类的肠道是食物消化和营养吸收的重要场所。鱼摄食后，食物的营养物质均依赖各种酶类的作用。食物中的蛋白质和多肽需要经过消化液中或肠壁细胞中的蛋白酶的水解，使成为肠细胞所能吸收的氨基酸。因此，肠道蛋白酶的活性高低对鱼的生长代谢起重要作用。

当下鱼类养殖的现状是：在高蛋白人工饲料的持续投喂下，水质环境容易变差，导致鱼消化吸收能力降低，抵抗力下降，当受到外界刺激时便极其容易爆发寄生虫、细菌性及病毒性疾病。目前有较多研究都集中在产酶基因的克隆、酶学性质研究以及工程菌的构建表达，将作为传统免疫增强剂及益生菌的酵母菌作为鱼源蛋白酶的载体，应用于水产养殖少有报道。因此，筛选具有高产蛋白酶活的菌株，分析其蛋白酶相关基因，利用分子生物学手段对相关基因进行克隆表达，在酵母细胞表面展示蛋白质，使蛋白酶基因得以表达，在鱼类养殖过程中对于提高鱼的消化能力、提高生长性能等具有重要的意义。

细菌噬菌体、革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均可以用于蛋白质的表面展示，但要将它们应用到食品和水产等其他领域，这些微生物存在许多缺点。如果用条件致病菌和致病菌表面展示蛋白质就存在很多潜在的危险，另外噬菌体和病毒大规模培养较为困难。酿酒酵母被认为是表面展示蛋白质的最佳微生物，一是该微生物安全，并且在食品工业，医学中已大量使用；二是酿酒酵母作为表达外源蛋白的宿主已有众多研究和多年历史，它的遗传体系和克隆方法都非常清晰，它能对外源蛋白质进行正确的折叠和糖基化；三是酿酒酵母有一整套分泌胞外蛋白质的机制，其展示的酶通过天然方式固定在细胞表面，对酶没有损伤。同时酿酒酵母培养方法简单可行，经济廉价，便于大规模生产。

发明内容

基于此，本发明的目的之一是提供一种鱼源蛋白酶基因及鱼源蛋白酶基因的表达蛋白，在提高鱼类消化能力中的应用，所述基因及其表达蛋白可以提高鱼对高蛋白人工饲料的消化能力，提高鱼的生长性能。

实现上述发明目的的具体技术方案如下：

鱼源蛋白酶基因在提高鱼类对高蛋白人工饲料消化能力中的应用，所述鱼源蛋白酶基因的开放阅读框具有如SEQ ID No.1、SEQ ID No.3或SEQ ID No.5所示的核苷酸序列，或为与SEQ ID No.1、SEQ ID No.3或SEQ ID No.5互补配对的核苷酸序列，或为编码氨基酸序列如SEQ ID No.2、SEQ ID No.4或SEQ ID No.6的核苷酸序列。

鱼源蛋白酶基因的表达蛋白在提高鱼类对高蛋白人工饲料消化能力中的应用，所述鱼源蛋白酶基因的表达蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2、SEQ ID No.4或SEQ ID No.6所示；或如SEQ ID No.2、SEQ ID No.4或SEQ ID No.6所示的氨基酸序列经取代、缺失和/或添加一个或多个氨基酸，但蛋白活性相同。

本发明还提供了一种插入有鱼源蛋白酶基因的开放阅读框的重组质粒和插入有鱼源蛋白酶基因的开放阅读框的酵母重组表达载体。

实现上述发明目的的具体技术方案如下：