[发明专利]DNase I及其药学上可接受的盐在制备精液稀释的药物中的应用

说明书

本发明属于畜禽繁殖技术领域，具体公开了DNase I及其药学上可接受的盐在制备精液稀释药物中的应用。本发明通过对NETs捕获精子的形态学观察、NETs的结构分析、LDH的释放、精子活力的检测及NETs释放水平的定量，以研究DNase I及其药学上可接受的盐在作为功能性精液稀释的药物以提高配种成功率的应用。经验证：山羊中性粒细胞能够释放典型的NETs结构捕获精子，同时可以剂量依赖性地降低精子活力，而DNase I可以极显著的降解捕获山羊精子的NETs结构，且DNase I具有降解山羊精子诱导NETs释放的应用效果，DNase I可应用于制备功能性精液稀释的药物中，以提高反刍动物配种成功率。

技术领域

本发明属于畜禽繁殖技术领域，具体涉及DNase I及其药学上可接受的盐在制备精液稀释的药物中的应用。

背景技术

反刍动物是偶蹄目中的一个亚目，反刍是指进食经过一段时间以后将在胃中半消化的食物返回嘴里再次咀嚼，反刍动物就是有反刍这种消化方式的动物，反刍动物的消化生理与单胃哺乳动物截然不同，要比单胃哺乳动物复杂得多。

山羊是反刍动物的一种，其生殖道病原感染、无菌性炎症以及物理损伤等均会直接导致配种成功率大幅下降或个体屡配不孕问题，究其原因与山羊生殖道天然免疫状况密切相关。中性粒细胞是天然免疫系统的重要细胞类型，中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)则是中性粒细胞除吞噬、降解以外的第三种抗病原机制。山羊授精过程中，无论何种方式影响生殖道健康，大量中性粒细胞均会出现在生殖道黏膜抗病原感染或参与生殖道组织损伤，而NETs是否同时参与捕获山羊精子而造成配种成功率的大幅下降尚未见报道。

因此，如何在解析山羊生殖道对精子免疫机制的基础上，研制一种新型山羊功能性精液稀释药物，对于提升配种成功率以及防治繁殖障碍性疾病均具有重要兽医实践意义。

发明内容

本发明提出DNase I及其药学上可接受的盐在制备精液稀释的药物中的应用，以解决现有技术中存在的一个或多个技术问题，至少提供一种有益的选择或创造条件。

为克服上述技术问题，本发明的第一方面提供了DNase I及其药学上可接受的盐在制备精液稀释药物中的应用。

具体的，DNase I又称为脱氧核糖核酸酶I，是一种可以消化单链或双链DNA产生单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸的核酸内切酶，也是一种内源性脱氧核糖核酸酶，能够降解DNA而被用作NETs标准降解剂，蛋白激酶(P38)、细胞外调节蛋白激酶(ERK_1/2)和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)等分子或信号通路均参与调控NETs的释放。本发明通过原代分离山羊中性粒细胞，建立NETs的形态学观察模型，证实了山羊NETs能够捕获精子，且具有典型的胞外诱捕网结构特征，NETs主要由组蛋白、髓过氧化物酶与DNA骨架构成；同时，NETs捕获精子过程与细胞坏死无关，可显著降低精子活力；且DNase I极显著降解捕获精子的NETs，可用于制备功能性精液稀释药物。

作为上述方案的进一步改进，所述DNase I药学上可接受的盐为可增强酶亲和力或直接催化磷酸氧键断裂的盐类。

优选的，所述盐类的阳离子，选自钠离子、钾离子、钙离子、镁离子、铁离子、亚铁离子、钴离子、铜离子、镍离子、锰离子、铵离子或锌离子中的任一种。

优选的，所述盐类的阴离子，选自硫酸根离子、醋酸根离子、氯离子、磷酸根离子、草酸根离子、马来酸根离子、富马酸根离子、苹果酸根离子、酒石酸根离子、柠檬酸根离子或苯甲酸根离子中的任一种。

具体的，所述药学上可接受的盐容易分离，可采用常规分离方法提纯，如溶剂萃取、稀释、重结晶、柱色谱和制备薄层色谱等。

作为上述方案的进一步改进，所述精液稀释药物适用于反刍动物精液稀释药物。具体的，反刍动物的生理特征与单胃哺乳动物截然不同，要比单胃哺乳动物复杂得多，适用于哺乳动物的精液稀释药物不能直接应用于反刍动物。