[发明专利]一种化学修饰的木聚糖酶及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种化学修饰的木聚糖酶，其特征在于：所述木聚糖酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，编码基因如SEQ ID NO:2所示，化学修饰剂为右旋糖酐。

2.根据权利要求1所述的化学修饰的木聚糖酶，其特征在于：所述化学修饰剂为含有醛基的右旋糖酐。

3.根据权利要求1所述的化学修饰的木聚糖酶，其特征在于：化学修饰剂与木聚糖酶通过氨基酸的氨基进行偶联。

4.根据权利要求2所述的化学修饰的木聚糖酶，其特征在于：所述含有醛基的右旋糖酐采用NaIO₄氧化右旋糖酐的邻羟基获得。

5.根据权利要求2所述的化学修饰的木聚糖酶，其特征在于：所述含有醛基的右旋糖酐采用150kDa的右旋糖酐。

6.权利要求1所述的化学修饰的木聚糖酶的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）木聚糖酶的制备

将木聚糖酶编码基因与表达载体pEt28a(+)相连接，并将连接产物转化至大肠杆菌BL21(DE3) 细胞，获得重组菌株；培养重组菌株进行发酵表达，发酵液破碎离心后，将上清液进行硫酸铵沉淀、离子交换柱纯化，获得木聚糖酶液；

（2）含醛基右旋糖酐的制备

避光下将2.4g NaIO₄溶于10mL纯水制得NaIO₄溶液，将其倒入10mL浓度为2g/mL的右旋糖酐溶液中，室温下避光搅拌8h，

反应完成后加入5mL的乙二醇反应2h后，反应液在8000-14000的透析袋中，过夜透析；

（3）木聚糖酶化学修饰物的制备

取1mL修饰剂与2mL木聚糖酶酶液，用pH 7.5的PBS溶液定容到10mL，加入0.1g木聚糖，35℃pH 7.0下反应6h后，加入0.1g氰基硼氢化钠，继续反应1h后，4℃下透析4h，得到木聚糖酶化学修饰物。