[发明专利]环状RNA hsa_circ_0001741的表达载体、重组工程菌及其应用

说明书

本发明提供一种环状RNA hsa_circ_0001741的表达载体，包含连接到环状RNA表达质粒中的环状RNA表达序列；所述环状RNA表达序列为与基因TNPO3的2、3和4号外显子依次连接的核苷酸序列相似度90％以上的脱氧核苷酸序列。hsa_circ_0001741能够有效地抑制ccRCC细胞的迁移和增殖，因此hsa_circ_0001741在作为肾癌转移病人的治疗和预后方面具有广泛的前景。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及环状RNA hsa_circ_0001741的表达载体、重组工程菌及其应用。

背景技术

肾细胞癌(Renal cell carcinoma,RCC)是常见的恶性肿瘤之一，全球每年大约有35万人被诊断为肾细胞癌WHO根据肿瘤细胞起源及其基因改变等特点将肾细胞癌分为透明细胞癌、乳头状细胞癌、嫌色细胞癌、集合管癌和未分类肾细胞癌等。肾透明细胞癌(clearcell Renal Cell Carcinoma，ccRCC)是临床上最常见的肾脏恶性肿瘤，其中约70％的肾细胞癌为肾透明细胞癌(ccRCC)。手术切除是目前治疗肾癌有效的方法，但仍有近1/3的肾癌患者在确诊时已发生远处转移，20％～40％手术后会出现复发并发展为转移性肾癌。转移性肾癌对传统的放、化疗及内分泌治疗均不敏感，患者预后差。

环状RNA(Circular RNA)是非编码RNA的一种，是一类首尾共价结合的、既无5’端帽子结构也无3’端多聚腺嘌呤尾的环状结构。随着高通量测序技术逐渐被运用到生命科学与医学研究中，越来越多的环状RNA被发现，其在疾病特别是恶性肿瘤的发病中发挥重要作用，是潜在的治疗新靶点和诊断标志物。目前已有部分研究者关注环状RNA在ccRCC中异常表达，及其与ccRCC发生发展和转移的关系，提示它们在ccRCC的诊断、预后和治疗中具有广阔的应用前景。

发明内容

一种环状RNA hsa_circ_0001741位于7号染色体(chr7):128655032–128658211，其亲本基因为线性TNPO3基因，有报道hsa_circ_0001741与卵巢癌耐药性相关。本发明在研究中发现hsa_circ_0001741在ccRCC表达下降，且验证了hsa_circ_0001741在ccRCC发生发展中的作用，并进一步提供了一种制备新型ccRCC治疗药物的构思。

本发明首先提供了一种环状RNA hsa_circ_0001741的表达载体，其包含连接到环状RNA表达质粒中的环状RNA表达序列；所述环状RNA表达序列为与基因TNPO3的2、3和4号外显子依次连接的核苷酸序列相似度90％以上的脱氧核苷酸序列。

在根据本发明的一个实施方案中，所述环状RNA表达序列为SEQ ID NO:1

GTTCATGCATGGGAGATCTCAGACCAGTTGTTACAGATCCGGCAGGATGTGGAGTCATGCTATTTTGCTGCACAGACCATGAAAATGAAGATTCAGACCTCATTTTATGAGCTCCCCACAGACTCTCATGCCTCTTTACGGGACTCATTGCTAACCCATATCCAGAACTTGAAAGACTTGTCACCTGTTATTGTAACGCAGCTGGCTTTAGCAATAGCAGATCTTGCCCTACAGATGCCTTCCTGGAAGGGATGTGTGCAAACACTGGTGGAAAAATACAGCAATGATGTGACTTCTTTGCCTTTTTTGCTGGAGATCCTTACAGTGTTACCTGAAGAAGTACATAGTCGTTCCTTACGAATTGGAGCTAATCGGCGCACAGAAATTATAGAAGATTTGGCCTTCTACTCTAGTACAGTAGTATCTCTATTG。

在根据本发明的一个实施方案中，所述环状RNA表达质粒选自pCD-ciR、pCD2.1-ciR、pLC5-ciR、pLCDH-ciR、pLO-ciR、pCE-RB-Mam、pcDNA3.1(+)CircRNA Mini Vector等环状RNA过表达载体中的任一种。