[发明专利]一种基于牛血清白蛋白与金属离子的模拟漆酶制备及应用

权利要求书

1.一种基于牛血清白蛋白与金属离子的模拟漆酶制备及应用，其特征在于，所述方法包括以下步骤：固定牛血清白蛋白的浓度为15mg/mL，铜盐溶液浓度在10～30mM之间，常温下反应30～90min；之后加入0.5～1.5M离子液体，反应5～10h；反应结束后，离心分离得上层清液，将上清液转移到透析袋中，透析48～72h；透析后所得溶液进行冷冻干燥，称取固体质量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于牛血清白蛋白溶于磷酸盐缓冲溶液(PBS)中；PBS缓冲液浓度为20mM，pH为7.0～7.4。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于铜盐溶液是选自硫酸铜，氯化铜，硝酸铜，醋酸铜其中一种。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于离子液体是选自四甲基氢氧化铵，四丁基氢氧化铵，氢氧化胆碱，乙醇胺，1-乙基-3-甲基咪唑醋酸盐中的一种。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所选用的透析袋的截留分子量为10000～70000Da。

6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于该类漆酶模拟酶可用于酚类物质的检测，测试方法为比色法。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于酚类物质是选自2,4-二氯苯酚，苯酚，邻苯二酚，间苯二酚，萘芬其中一种。

8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于比色法对酚类物质的检测包括以下具体步骤：室温条件下，将干燥得到的BSA-Cu模拟酶分散在超纯水中，得到0.1-1mg/mL的溶液，取100μL上述溶液与700μL磷酸盐缓冲溶液用涡旋振荡迅速混合均匀，然后分别加入100μL浓度梯度范围为10-100μg/mL的酚类物质以及100μL的4-AP(1mg/mL)，立即用涡旋振荡混合均匀，在室温下反应30-60min，用紫外分光光度计读取510nm处的吸光值，建立浓度-吸光度标准曲线，得标准曲线方程；按相同方法测出该质量浓度漆酶催化酚类物质的活性，将BSA-Cu模拟酶与漆酶进行活性比较。