[发明专利]蛋白、跨膜核酸解旋纳米孔及其构建方法与应用

权利要求书

1.以下蛋白在制备纳米孔或者含导电通道的膜中的用途，其特征在于：

所述蛋白为（1）分离的牛乳头瘤病毒双链DNA解旋酶的306-605位氨基酸构成的蛋白，其序列为SEQ ID No.1所示；

或 (2)：在为 (1)限定的蛋白的氨基酸序列中经过取代和/或缺失和/或插入至少一个氨基酸所得的变体；所述的蛋白变体为SEQ ID No.1所示的蛋白第421位由K突变为L和/或第323位由H突变为W得到的蛋白变体。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述SEQ ID No.1所示的蛋白第421位由K突变为L得到的蛋白变体，或第323位由H突变为W得到的蛋白变体的氨基酸序列分别如SEQID No.6或SEQ ID No.7所示。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：两个以上所述的蛋白作为亚基形成的多聚体蛋白。

4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于：所述的构成多聚体蛋白的亚基数为4～8个。

5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于：所述的构成多聚体蛋白的亚基数为6个。

6.根据权利要求3-5任一项所述的用途，其特征在于：所述的多聚体蛋白为同源多聚体或异源多聚体。

7.含导电通道的膜，其特征在于：包括：（1）膜层；和（2）分离的多聚体蛋白，所述多聚体蛋白嵌入到所述膜层以形成孔道，外加跨膜电势时可以经过所述孔道导电；所述多聚体蛋白由两个以上蛋白作为亚基形成；所述蛋白为（1）分离的牛乳头瘤病毒双链DNA解旋酶的306-605位氨基酸构成的蛋白，其序列为SEQ ID No.1所示；

或 (2)：在为 (1)限定的蛋白的氨基酸序列中经过取代和/或缺失和/或插入至少一个氨基酸所得的变体；所述的蛋白变体为SEQ ID No.1所示的蛋白第421位由K突变为L和/或第323位由H突变为W得到的蛋白变体。

8.根据权利要求7所述的含导电通道的膜，其特征在于：其中所述膜层包括脂层或双亲高分子聚合物形成的单层或双层膜。

9.根据权利要求8所述的含导电通道的膜，其特征在于：其中所述脂层包含两亲脂类。

10.根据权利要求8所述的含导电通道的膜，其特征在于：其中所述脂层选自平面脂质膜层或脂质体。

11.根据权利要求8所述的含导电通道的膜，其特征在于：所述的单层膜由PMOXA-PDMS-PMOXA形成，PMOXA表示二甲基二唑林；PDMS表示聚二甲基硅氧烷。

12.根据权利要求7所述的含导电通道的膜，其特征在于：被施加电势时，所述含导电通道膜能够通过所述孔道易位DNA或RNA。

13.根据权利要求7所述的含导电通道的膜，其特征在于：所述SEQ ID No.1所示的蛋白第421位由K突变为L得到的蛋白变体，或第323位由H突变为W得到的蛋白变体的氨基酸序列分别如SEQ ID No.6或SEQ ID No.7所示。

14.根据权利要求7所述的含导电通道的膜，其特征在于：两个以上所述的蛋白作为亚基形成的多聚体蛋白。

15.根据权利要求14所述的含导电通道的膜，其特征在于：所述的构成多聚体蛋白的亚基数为4～8个。

16.根据权利要求15所述的含导电通道的膜，其特征在于：所述的构成多聚体蛋白的亚基数为6个。

17.根据权利要求7-16任一项所述的含导电通道的膜，其特征在于：所述的多聚体蛋白为同源多聚体或异源多聚体。