[发明专利]一种用于微生物孢子的快速检测方法

说明书

本发明公开了一种用于微生物孢子的快速检测方法。1)微生物孢子收集，空气中的微生物孢子收集自空气采样器滤网，表面微生物孢子收集自采样拭子；2)非孢子微生物去除；3)微生物孢子离心、浓缩、热裂解；4)检测试剂配制与微生物孢子AMP检测；5)微生物孢子数量计算。本发明适用于对洁净间空气和表面微生物孢子进行检测，相较于常规微生物孢子培养的检测丰富，本方法更加便捷，检测时间和所需成本大幅降低，可实现洁净间空气和表面微生物孢子的即时检测，显著提高了微生物孢子检测能力。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体属于微生物孢子快速检测领域，尤其涉及一种基于微生物孢子AMP与标准UTP混合发射荧光强度降低的微生物孢子快速检测方法，可大幅度缩短微生物孢子的检测时间。

背景技术

微生物作为地球上广泛存在的生命形态，具有很强的极端环境适应性。在空间站和航天员乘舱内有多种微生物被检出，具有腐蚀性、致病性等危害较大的真菌有黄曲霉、黑曲霉、桔灰曲霉、腊叶芽枝霉和杂色曲霉等，细菌有葡萄球菌、链球菌和杆菌等，以上微生物均具有产孢特性，在长期适宜的温湿度环境下，微生物会附着在航天器舱体内部材料和设备的表面形成生物膜，腐蚀材料并加速材料自身的老化速度，影响材料自身力学、热学和绝缘性能等，进而影响航天器寿命和在轨运行可靠性，同时微生物也会危害人类健康。因此，在航天器生产组装过程中，实时监测微生物孢子污染对指导后续消杀，保证航天器安全具有重要作用。

目前，为避免微生物的存在导致航天器中的设备出现损坏，国际空间站密封舱体采用大量的金属与高分子材料，并对其进行严格消杀。在这种情况下，极端微生物会通过产孢的方式，抵抗消杀操作所产生的极端环境，保持自身的生理活性，在环境适宜时由休眠态转变为营养体状态在洁净间内部和航天器表面附着和生长。然而，目前被广泛使用的针对微生物孢子的检测方法仍然是以培养法为主，囿于培养法的微生物孢子检测时间的限制，难以实时得到航天器表面微生物孢子信息；同时，实验室可培养微生物孢子只占到微生物孢子总数的0.1％-10％，会严重低估航天器表面微生物孢子量。因此，提出一种不依赖于培养的微生物孢子快速检测方法，可以提高我国航天器微生物孢子检测水平。而且该检测方法在食品药品检验、水源检测和炭疽杆菌检测方面都可广泛应用。

发明内容

为快速检测微生物孢子，提供采样位置微生物孢子污染信息，本发明提供了一种基于AMP的UTP荧光强度降低检测微生物孢子的微生物孢子快速检测方法。

微生物孢子快速检测方法，取样步骤如下：

1)微生物孢子收集，空气中的微生物孢子收集自空气采样器滤网，表面微生物孢子收集自采样拭子；

2)非孢子微生物去除；

3)微生物孢子离心、浓缩、热裂解。

微生物孢子快速检测方法，检测步骤如下：

1)使用移液器吸取50μL待测样本至特定反应容器；

2)使用移液器吸取50μLUTP溶液至特定反应容器中，与样品混合静置5min；

3)将特定反应容器放置于单光子计数器感光区，加入荧光素/荧光素酶溶液获得荧光强度；

4)根据标准曲线，计算微生物孢子数量。

微生物孢子快速检测方法，试剂配制步骤如下：

1)荧光素/荧光素酶溶液，荧光素浓度为0.1mmol/mL，荧光素酶浓度为0.1mg/mL，-18℃保存。

2)AMP标准溶液，AMP标准溶液母液浓度为5mg/mL，共稀释6个梯度，0.5mL/管分装，-18℃保存。

上述微生物孢子快速检测方法中，所述荧光反应主体为AMP、UTP和荧光素/荧光素酶溶液。