[发明专利]莲叶桐核酸提取改良版CTAB法在审
| 申请号： | 202110973065.4 | 申请日： | 2021-08-24 |
| 公开（公告）号： | CN113584018A | 公开（公告）日： | 2021-11-02 |
| 发明（设计）人： | 王勇;于靖;倪靓;谭佐莉;张修含;张世杰 | 申请（专利权）人： | 海南师范大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 成都方圆聿联专利代理事务所(普通合伙) 51241 | 代理人： | 苟铭 |
| 地址： | 571158*** | 国省代码： | 海南;46 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 莲叶 核酸 提取 改良 ctab | ||
1.莲叶桐核酸提取的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)取适量新鲜莲叶桐叶片，置于预冷的研钵中，加入液氮充分研磨，将粉末转至离心管中，加入预热温度为65℃的裂解液，混匀，加入RNA酶，涡旋震荡1min，混匀后65℃水浴锅中水浴加热40min，每隔10min颠倒摇匀一次，所述裂解液组成为：2％(m/v)CTAB,0.1mol/LTris-HCl pH8.0,20mmol/L EDTA,1.4mol/L NaCl,2％(m/v)β疏基乙醇，2％(m/v)PVP；
(2)放置冷却至室温，加入等体积的Tris平衡酚︰氯仿︰异戊醇＝25︰24︰1,在转速为11000～13500rpm室温下离心10～15min；
(3)取上清液转入一新离心管，加入1/10倍体积的3mol/LNaAc和等体积的异丙醇，混匀于-20℃放置40～60min，在转速为11000～13500rpm 4℃离心10～15min；
(4)弃上清，沉淀用体积浓度70％乙醇洗涤2～4次，加入50～250μL TE，充分混匀后，加入1/10倍体积的3mol/LNaAc和等体积的异丙醇，混匀于-20℃放置40～60min，在转速为11000～13500rpm 4℃离心10～15min；
(5)弃上清，沉淀用体积浓度70％乙醇洗涤2～4次，室温静置20～30min晾干，加入50～250μL TE缓冲液溶解，充分混匀后，置于－20℃冰箱中保存。
2.根据权利要求1所述的莲叶桐核酸提取的方法，其特征在于，所述步骤(1)中的RNA酶浓度为20mg/ml。
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